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液相色譜柱的使用和配制

作者:宋檢 時間:2022-10-26 來源:互聯(lián)網(wǎng)

液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關(guān)鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。

1 液相色譜柱的使用

色譜柱在使用前,*好進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能 可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中 的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。

樣品的前處理:

(a)*好使用流動相溶解樣品。

(b)使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)*性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

(c)使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2 流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點(diǎn):

(a)流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

(b)流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

(c)流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

3流動相流速的選擇

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求* 佳柱效,*好使用*佳流速。對內(nèi)徑為4.6 m的色譜柱,流速一般選擇1 mL/min,對于內(nèi)徑為4.0 mm柱,流速 0.8 mL/min為佳。當(dāng)選用*佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

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