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孔雀石綠是食品安全領(lǐng)域里繼蘇丹紅以后在國(guó)際上引起轟動(dòng)的又一高危物品,其具有高毒素、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用,因此,食品中孔雀石綠的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)技術(shù)成為食品安全領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)。近日,一種新型檢測(cè)技術(shù)的問世,將有效解決此問題。
孔雀石綠是人工合成的有機(jī)化合物。其生產(chǎn)是由1摩爾分子的苯甲醛(Benzaldehyde)和2摩爾分子的二甲苯胺在濃鹽酸混和下,加熱縮合成隱色素堿(Leuco base),在酸性條件下加過氧化鉛使其氧化,并在堿性液中沉淀出色素堿。它屬于三苯甲烷型的綠色染料。
孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體,又名堿性綠、嚴(yán)基塊綠、孔雀綠,它既是殺真菌劑,又是染料,易溶于水,溶液呈藍(lán)綠色,廣泛用于真絲、羊毛、皮革、麻制品、陶瓷制品、棉布等的染色。孔雀石綠很早曾經(jīng)作為殺菌劑、殺蟲劑、消毒劑用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。長(zhǎng)期以來,漁民都用它來預(yù)防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等,而且為了使鱗受損的魚延長(zhǎng)生命,在運(yùn)輸過程中和存放池內(nèi),也常使用孔雀石綠。鑒于孔雀石綠的危害性,許多國(guó)家都將孔雀石綠列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物(觀賞魚除外)。我國(guó)也于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中,禁止用于所有食品動(dòng)物。
孔雀石綠的檢測(cè)方法
孔雀石綠在水生動(dòng)物體內(nèi)迅速代謝成無色孔雀石綠,而無色孔雀石綠的毒性甚至超過孔雀石綠,所以通常將孔雀石綠和無色孔雀石綠的總量作為動(dòng)物源性食品中孔雀石綠殘留的限量指標(biāo)。孔雀石綠的檢測(cè)方法以理化檢測(cè)法和免疫學(xué)檢測(cè)法為主。其中理化檢測(cè)法包括:薄層層析法、分光光度法、 高壓液相色譜法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等,相較之下免疫學(xué)檢測(cè)方法更為常用。
酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA):酶聯(lián)免疫法的基本原理是將酶分子與抗體分子共價(jià)結(jié)合,結(jié)合產(chǎn)物不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。底物可在酶的作用下使其所含的供氫體由無色的還原型轉(zhuǎn)變成有色的氧化型,出現(xiàn)顏色反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與樣品中相應(yīng)抗體或抗原的量呈一定的比例,顯色反應(yīng)可通過酶標(biāo)儀進(jìn)行定量測(cè)定。ELISA方法是一種特異、敏感的檢測(cè)方法,可分為: 間接競(jìng)爭(zhēng)抑制法、抗體/抗原包被直接競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法。
其中間接競(jìng)爭(zhēng)抑制法,是用人工抗原包被酶反應(yīng)板后加入抗血清和待測(cè)藥物進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng),洗滌后板上只留有與包被抗原結(jié)合的抗體(一抗) ,再加酶標(biāo)記物的二抗與一抗結(jié)合,洗滌后加入酶的底物。酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物量與被結(jié)合的一抗和二抗量呈正比,與待測(cè)樣品中相應(yīng)的藥物量呈反比。其特點(diǎn)在于一個(gè)一抗可結(jié)合多個(gè)二抗,放大待測(cè)物的量,提高了方法的靈敏度。截至2013年的商品ELISA孔雀石綠試劑盒,都只能檢測(cè)孔雀石綠總量,不能同時(shí)檢測(cè)孔雀石綠和無色孔雀石綠各自的含量,在樣品前處理過程中應(yīng)注意根據(jù)抗原和抗體的類型,將目標(biāo)化合物全部轉(zhuǎn)化成相對(duì)應(yīng)的形態(tài)。
《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)正式發(fā)布。這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的出臺(tái),將給中國(guó)水產(chǎn)品的養(yǎng)殖、生產(chǎn)、加工、消費(fèi)、出口提供新的質(zhì)量檢測(cè)依據(jù)。由于孔雀石綠中含有致癌物質(zhì),所以包括中國(guó)在內(nèi)的一些國(guó)家已宣布禁止其在經(jīng)濟(jì)魚類(觀賞魚除外)養(yǎng)殖過程中使用。據(jù)悉,該標(biāo)準(zhǔn)可滿足水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留的篩選以及疑似樣品的確證。
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