·中藥分析檢測項目

· 中藥分析檢測方法
一、實驗目的
使用飛行時間高分辨質譜搜索補藥藥物中中西藥成分，分析補藥藥物中西藥組成成分。

二、供試品制備方法
取“樣品”中藥液體于2ml離心管中，放入高速離心機中13000r/min離心10min，過0.22um微孔濾膜后裝入1.5ml自動進樣瓶內，得到補藥提取物樣品。同樣條件得到空白對照樣品。將樣品放入4℃冰箱保存，在分析前取出（保存時間不能超過24h）。

三、色譜條件
色譜儀器為：島津LC-30A。色譜柱為Unitary C18(2.8μm，2.1mm*150mm)；柱溫為30℃；流速為0.3ml/min；進樣量為2μl；流動相采用乙腈-0.1%甲酸水溶液的梯度洗脫程序，具體見表1。

表1 流動相梯度洗脫程序

四、色譜條件
質譜儀器為AB Sciex Triple TOF 5600+。
離子化模式為電噴霧正離子模式，離子源電壓分別為?5500V，離子源溫度為500℃，去簇電壓（DP）分別為?100 V，碰撞能量（CE）分別為?35 eV，碰撞能量擴展（CES）分別為15eV。霧化氣體為氮氣，輔助氣?1 為?50 PS I，輔助氣?2 為?50 PSI，氣簾氣為?40 PSI。一級質譜母離子掃描范圍為?50～1000，IDA 設置響應值超過100 cps的6個*高峰進行二級質譜掃描，子離子掃描范圍為50～1000，開啟動態背景扣除（DBS）。
離子化模式為電噴霧負離子模式，離子源電壓分別為-4500V，離子源溫度為500℃，去簇電壓（DP）分別為?100 V，碰撞能量（CE）分別為?-35 eV，碰撞能量擴展（CES）分別為15eV。霧化氣體為氮氣，輔助氣?1 為?50 PS I，輔助氣?2 為?50 PSI，氣簾氣為40 PSI。一級質譜母離子掃描范圍為50～1000，IDA 設置響應值超過100 cps的6個*高峰進行二級質譜掃描，子離子掃描范圍為50～1000，開啟動態背景扣除（DBS）。

五、實驗結果?

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本實驗查找了人參、靈芝、黨參、三七、甘草、山藥、熟地、白芍、枸杞、當歸、麝香、黃芪、白術、冰片、陳皮、黃連、葛根、共17種中藥、維生素、氨基酸及西藥成分，建立起412種成分數據庫，采用飛行時間高分辨質譜對“樣品”中藥提取物定性檢測，得出結果如下：

5.1 樣品中藥活性成分分析
5.1.1通過無目標物搜索，從質譜圖中找到響應值超過500的成分共6578種；
5.1.2通過數據庫中藥活性成分目標物搜索：

（1）中藥活性成分檢測
補藥中藥正、負離子模式下共檢測到113種活性成分，其中質譜響應強度大于10000的活性成分共有32種，按質譜響應強度排序分別為：葛根素、櫻黃素、芫花素、毛蕊異黃酮、鷹嘴豆芽素A、芒柄花苷、桉葉醇、茅術醇、β-欖香醇、毛蕊花糖苷、6-O-E麥角甾苷、白術內酯、(+)-丹芝酸 D、京尼平苷酸、沒食子酸乙酯、8-表-馬錢子苷酸、靈芝醛 B、齊墩果酮酸、尿嘧啶核苷、白術三醇、甘草苷、甜菜堿、檸檬酸單甲脂、2-甲氨基苯酸甲酯、芒柄花素、異鼠李素、5-羥基-6,7,8,3,4-五甲氧基黃酮、7-羥基-3,5,6,3,4-五甲氧基黃酮、5-去甲川陳皮素、刺囊酸、闊葉合歡萜酸、靈芝酸 L

（2）中藥粉末組方分析
將中藥中檢測到的中藥活性成分歸類，統計檢測的中藥活性成分在數據庫中的占比，從而判斷補藥中藥組方。