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脊髓灰質炎病毒殺滅試驗，主要目的是測定消毒劑對脊髓灰質炎病毒(Poliovirus，PV）滅活所需的劑量，以驗證病毒污染物消毒實用劑量。脊髓灰質炎病毒殺滅試驗的試驗原理在于，用細胞感染法測定消毒劑作用前后(或實驗組與對照組)樣本中脊髓灰質炎的量，以細胞病變作為判斷指標，確定各組病毒的感染滴度，計算消毒劑對脊髓灰質炎的滅活率。

脊髓灰質炎病毒殺滅試驗分組
1）試驗組。根據所測消毒劑對其他微生物的殺滅或滅活劑量估計，設定適宜的濃度與作用時間組（不少于1個濃度，3個作用時間)，對作用時間的設計應不短于30s。
2）陽性對照組。用去離子水代替消毒劑，按試驗組規定步驟加入脊髓灰質炎懸液進行試驗和培養，觀察脊髓灰質炎生長是否良好。
3）陰性對照組。用不含脊髓灰質炎的完全培養基作為陰性對照，觀察所用培養基有無污染，細胞是否生長良好。

脊髓灰質炎懸液定量滅活試驗的操作程序
1)從液氮中取出凍存的試驗宿主細胞，在37℃溫水中迅速融化，并用細胞維持液洗滌兩次后，轉種于加有10ml完全培養基培養瓶中。逐日觀察細胞生長情況，在細胞長滿單層時，用于消毒試驗。
2)取出低溫凍存的脊髓灰質炎-1毒株，37℃水浴融化，用細胞維持液作10倍稀釋，然后接種于含已經長滿單層細胞的細胞瓶內，置37℃溫箱中，使與細胞吸附、生長。逐日觀察病變，待3/4細胞出現病變時，收獲病毒。收獲時，將培養液取出，用超聲波或反復凍融破碎宿主細胞，盡快離心，并將含病毒的上清液按每管1.Oml 分裝于無菌離心管( 1.5ml）中，冷凍保存于-80℃備用。
3)取待測消毒劑，用滅菌硬水稀釋至所需濃度的1.25倍，于20℃±1℃水浴中備用。
4）取100μ 1有機干擾物質與100μ 1病毒原液混合，于20℃+1℃水浴中作用5min，加入0.8ml待檢消毒劑，立即混勻并記時。作用規定時間，立即取出0.1ml，加入中和劑中混勻；或用經鑒定合格的除藥方法處理。
5）陽性（病毒）對照組試驗中，用無菌去離子水代替消毒劑。
6）各組分別進行病毒滴度測定，可采用終點稀釋法或噬斑法進行。
7)試驗重復3次。
8）終點稀釋法操作步驟：先用細胞維持培養液對待滴定樣本做10倍系列稀釋，然后在96孔培養板上滴定各稀釋度樣本中殘留的病毒量，每個稀釋度做4孔(各孔中應該已經長滿單層的宿主細胞)，在37℃，放置1h~2h，以確保殘留病毒全部吸附在細胞上。取出培養板，更換細胞維持培養液。繼續放入二氧化碳培養箱中(37℃，5% CO ?)培養，逐日在顯微鏡下觀察細胞病變，連續觀察3d，逐孔觀察并記錄細胞病變情況。終點稀釋法病毒感染滴度的計算：以半數細胞感染劑量表示。
9）噬斑法操作步驟：先用細胞維持培養液對待滴定樣本做10倍系列稀釋，然后接種于細胞培養瓶中，滴定各稀釋度樣本中殘留的病毒量。接種細胞前，將生長致密的單層細胞中的培養液傾出，加入1ml待測樣品，放置37℃吸符1h~2h，傾出樣液，加入含0.8%瓊脂的細胞維持液3m1，冷卻后翻轉細胞瓶，放置37℃培養48h~72h。然后每瓶細胞加入2m1甲醛溶液固定數分鐘，用自來水沖洗后加結晶紫溶液染色數分鐘，沖洗干凈后計數。細胞瓶內圓形不著色的透明區即為一個蝕斑單位，每毫升測試樣品中的病毒含量計算：pfu/m1=平板平均蝕斑數×稀釋倍數。為了便于計數，病毒蝕斑數一般控制在每細胞瓶10pfu~30pfu。

脊髓灰質炎病毒殺滅試驗的計算
平均滅活對數值按下式計算：設陽性（(病毒）對照組平均病毒感染滴度的為No，試驗（消毒）組平均病毒感染滴度為Nx。
平均滅活對數值= log No-log Nx

脊髓灰質炎病毒殺滅試驗的評價規定
1）脊灰病毒滅活試驗，可用于評價醫療器械、食具、物體表面和皮膚用化學消毒劑對病毒的滅活效果。病毒的滅活滴度，應達到4個對數值。
2）在正常情況下，3次試驗的平均滅活對數值≥4.00，可判為對脊髓灰質炎病毒污染物消毒的實驗室試驗合格。同時，陽性對照組病毒滴度對數值應在5~7之間。

脊髓灰質炎病毒殺滅試驗的注意事項
1）操作人員應具有基本的病毒學實驗工作經驗，盡量使用移液器與無菌一次性吸頭。
2）在殺菌試驗中，每次均應設置陽性對照。
3）如使用病毒載體進行試驗，可參照上述懸液定量試驗程序，并遵照病毒學原理進行適當修改后使用。
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