1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定方法

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定。

2.規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.原理

試樣中的脂肪用溶劑提取。提取物在堿性條件下與甲醇反應(yīng)生成脂肪酸甲酯,用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀分離順式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯,外標(biāo)法定量。

4.試劑和材料

除非另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 石油醚:沸程30℃～60℃。

4.2 乙醚(C4H10O)。

4.3 乙醇(C2H6O):體積分?jǐn)?shù)為95%。

4.4 正己烷(C6H14):色譜純。

4.5 氨水(NH3H2O):25%～28%。

4.6 氫氧化鉀(KOH)。

4.7 甲醇(CH4O)。

4.8 淀粉酶:活力單位:1.5U/mg,根據(jù)活力單位大小調(diào)整用量。

4.9 無水硫酸鈉(Na2SO4)。

4.10 氫氧化鉀-甲醇溶液(4mol/L):稱取26.4g氫氧化鉀,溶于約80mL甲醇中。冷卻至室溫,用甲醇定容至100mL,加入約5g無水硫酸鈉(4.9),充分?jǐn)嚢韬筮^濾,保留濾液。

4.11 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品:十八酸甲酯(C18:0)、反-9-十八碳一烯酸甲酯(Cl8:1-9t)、順-9-十八碳一烯酸甲酯(Cl8:1-9c)、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯(Cl8:2-9t,12t)、順-9,12-十八碳二烯酸甲酯(C18:2-9c,12c),放入冰箱在-15℃以下保存。

4.12 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液:濃度分別為10.0mg/mL。稱取500mg(精確到0.1mg)反-9-十八碳一烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品和反-9,12-十八碳二烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品,分別用正己烷溶解并定容至50.0mL。放入冰箱在-15℃以下保存。

4.13 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液:濃度分別為1.0mg/mL。分別吸取兩種反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.12)10.0mL入同一100mL容量瓶中并用正己烷(4.4)定容。臨用前配制。亦作為標(biāo)準(zhǔn)曲線*高濃度。

4.14 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液:臨用前配制。分別吸取反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.13),0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于l0mL容量瓶中,用正己烷定容,此濃度即為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mgmL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

4.15 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合液:將脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(4.11),用正己烷配制成脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液,其中每種成分的濃度約為0.05mg/mL至0.5mg/mL。用于進(jìn)行順反脂肪酸甲酯分離程度及定性的鑒定。

4.16 剛果紅溶液:稱取1g剛果紅溶解稀釋至100mL。

5.儀器和設(shè)備

5.1 氣相色譜儀,帶氫火焰離子化檢測器。

5.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

5.3 恒溫水浴:40℃～80℃。

5.4 渦旋振蕩器。

5.5 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4000轉(zhuǎn)/分鐘。

5.6 毛氏抽脂瓶。

5.7 毛氏抽脂瓶搖混器。

5.8 脂肪收集瓶:圓底燒瓶,與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀配套。

5.9 天平:感量為0.1mg。

6.分析步驟

6.1 試樣處理

6.1.1 含淀粉的試樣:稱取混合均勻的固體試樣約1.5g,液體試樣約5g(精確到0.1mg)于毛氏抽脂瓶中,加入約0.1g淀粉酶(酶活力1.5U/mg),混合均勻后,加入8mL～10mL45℃±2℃的水,搖勻。蓋上瓶塞置于55℃±2℃水浴(5.3)中2h,每隔10min搖混一次。加入兩滴約0.1mol/L的碘溶液,檢驗(yàn)淀粉是否水解完全。若無藍(lán)色岀現(xiàn),則水解完全,否則將毛氏抽脂瓶重新置于水浴中,直至藍(lán)色消失,取出冷卻至室溫。

6.1.2 不含淀粉的試樣:稱取混合均勻的固體試樣約1.5g,液體試樣約10g(精確到0.1mg)于毛氏抽脂瓶(5.6)中,加入10mL45℃±2℃的水,將試樣洗入毛氏抽脂瓶(5.6)的小球中,充分混合,直到試樣完全散開,冷卻至室溫。

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