1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中土霉素、四環(huán)素、金霉素的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限：50μg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

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GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(GB/T 6682-1992，neq ISO 3696：1987)

3 原理

試樣提取液經(jīng)離心后，上清液用 Oasis HLB 固相萃取柱和陰離子交換柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。

4 試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲醇：色譜純

4.2 乙腈：色譜純。

4.3 鹽酸。

4.4 0.4molL鹽酸溶液：準(zhǔn)確量取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。

4.5 草酸。

4.6 0.01Lmol/L草酸甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mn容量瓶中。

4.7 甲酸

4.8 甲酸溶液：準(zhǔn)確量取4mL甲酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻即可。

4.9 土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥95%。

4.10 土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：0.1mgmL。準(zhǔn)確稱取適量的土霉素、四環(huán)素、金霉素、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，分別用甲醇配成0.1mgmL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液貯存在-18℃冰柜中。

4.11 土霉素、四環(huán)素、金霉素基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要吸取適量土霉素、四環(huán)素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用空白樣品提取液稀釋成適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在4℃保存，可使用三天。

4.12 OaSis hlB固相萃取柱或相當(dāng)者：500mg，6mL。使用前分別用5mL甲醇和10mL水預(yù)處理，保持柱體濕潤(rùn)。

5 儀器

5.1 液相色譜-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和1mg各一臺(tái)

5.3 旋渦混勻器。

5.4 固相萃取儀。

5.5 高速離心機(jī)

5.6 具塞錐形瓶：50mL。

5.7 離心管：50mL，5mL。

5.8 氮吹儀

5.9 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

6 試樣的制備

6.1 提取

準(zhǔn)確稱取3.0g樣品(準(zhǔn)確至0.01g)，置于50mL具塞錐形瓶中，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，加入鹽酸溶液(4.4)30mL，旋渦混勻1min，超聲20min，移至50mL離心管中，5000r/mnin離心10min，取上清液，待凈化。

6.2 凈化

取10mL上清液與40mL水稀釋混勻，再移入下接 Oasis hlb柱的貯液器中。溶液以小于1.0mL/min的流速過柱，然后依次用甲醇-水溶液(4.9)淋洗，減壓抽干20min。用草酸甲醇溶液(4.6)5mL洗脫，收集洗脫液于40℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用1.0mL流動(dòng)相溶解殘?jiān)?2000r/min離心10min，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾后，待測(cè)。

7 測(cè)定步驟

7.1 測(cè)定

7.1.1 液相色譜條件

色譜柱：Inertsil C8，3.5μm，150mm×2.1mm(id)或相當(dāng)者；

流動(dòng)相：乙腈十甲醇+0.4%甲酸溶液(18+4+78)；

流速：0.2mL/min；

柱溫：25℃；

進(jìn)樣量：20μL。

7.1.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；

電噴霧電壓、碰撞電壓等條件優(yōu)化至*佳值；

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)見表1。

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