對輻射危害有輔助保護功能的測定，中國上海飛凡檢測報告*權威！詳詢：400-101-7153?? 152 0173 3840 (王總)，地址：上海市豫園路750號。

1?? 外周血白細胞計數實驗???? 1.1?原理???? 外周血白細胞數減少是一次性全身? γ? 射線照射引起輻射損傷的表現之一，在一定范圍內，照射劑量與外周? 血中白細胞數成反比，恢復時間與外周血中白細胞數成正比，外周血中白細胞數可代表血液系統受損的狀? 況。具有輻射危害輔助保護作用的受試物對受輻射損傷機體的血液系統具有防護作用。???? 1.2?儀器和試劑???? 20μL?定量取血管、血球計數板、顯微鏡、?1% ?鹽酸等。???? 1.3?實驗方法???? 1.3.1?? 實驗動物：小鼠，?18?－?22g?，單一性別，每組?10?－?15?只。???? 1.3.2?? 劑量分組及受試樣品給予時間???? 實驗設三個劑量組和一個輻射模型對照組，以人體推薦量的?10?倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，? 必要時設陽性對照組。受試樣品于照射前給予?14?－?30?天，照射后仍然給予受試物，必要時可延長至?45?天。???? 1.3.3?? 實驗步驟???? 受試樣品組于照射前后經口連續給予受試樣品，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量? γ? 射線全身照射一? 次，照射劑量宜選擇?3Gy?－?5Gy?。分別于照射前、照射后第?3?天、照射后第?14?天三次采末梢血?20μL?，加入?0.38mL 1?％鹽酸中，混勻后，加入血球計數板中，計算計數池中四個大方格中白細胞總數。????????????????????????????? 四個大方格中白細胞總數???? 白細胞數（?10?9?/L?）?= -------------------------×? 稀釋倍數???? ×?10?7????????????????????????????????????? 4?????? 1.4?? 數據處理及結果判定???? 白細胞數為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算?F?值，?F?值?< F?0.05?,?結論：各組均數間差異無顯著性；?F?值? ≥F?0.05?,P≤0.05,?用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較? 方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后? 的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。???? 照射前的外周血白細胞計數，用于各組間白細胞數目的均衡性檢驗，劑量組與輻射模型對照組比較，差異? 無顯著性，再進行照射及后續實驗。???? 照射后?3?天、?14?天輻射模型對照組的白細胞數分別與照射前進行自身比較，差異有顯著性，則判定輻射損? 傷模型成立；任一時間點、任一劑量組與輻射模型對照組比較，白細胞總數增多，差異有顯著性，則可判? 定該實驗陽性。???? 2?．骨髓細胞?DNA ?含量或骨髓有核細胞數實驗???? 2.1?原理???? 骨髓細胞?DNA?含量或骨髓有核細胞數降低是一次性全身? γ? 射線照射引起輻射損傷的表現之一，? 在一定范圍? 內，照射劑量與骨髓細胞?DNA?含量或骨髓有核細胞數成反比，恢復時間與骨髓細胞?DNA?含量或骨髓有核? 細胞數成正比，骨髓細胞?DNA?含量或骨髓有核細胞數可代表造血系統受損的狀況。具有輻射危害輔助保? 護作用的受試物對受輻射損傷機體的造血系統具有防護作用。???? 2.2?儀器和試劑???? 血球計數板、顯微鏡、注射器、手術器械、紫外分光光度計、?Hank’s?液等。???? 2.3?實驗方法???? 2.3.1?? 實驗動物：小鼠，?18?－?22g?，單一性別，每組?10?－?15?只。???? 2.3.2?劑量分組及受試樣品給予時間?

實驗設三個劑量組和一個輻射模型對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品于照射前給予14－30天，照射后仍然給予受試物，必要時可適當延長至45天。 2.3.3 實驗步驟

受試樣品組于照射前后經口連續給予受試樣品，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量γ射線全身照射一次，照射劑量宜選擇3Gy－5Gy。于照射后第3天，頸椎脫臼殺死小白鼠，剝離出股骨，用1mL注射器（6.5號針頭）吸取一定體積的Hank’s液，沖出股骨中的全部骨髓細胞；*后，讓細胞懸液通過4號針頭的注射器，使細胞在懸液中充分分散。

鏡下計數每mL骨髓細胞懸液中的有核細胞數。 或用紫外分光光度計260nm處測定DNA含量。 2.4 數據處理及結果判定

骨髓有核細胞數或骨髓細胞DNA含量為計量資料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值< F0.05,結論：各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。

輻射模型對照組與陰性對照組骨髓有核細胞數或骨髓細胞DNA含量進行兩樣本均數的成組雙側t或t’檢驗，差異具有顯著性，則判定輻射損傷模型成立。

任一劑量組與輻射模型對照組比較，骨髓有核細胞數或骨髓細胞DNA含量增多，差異有顯著性，則可判定該實驗陽性。 3.小鼠骨髓細胞微核實驗 3.1 原理

骨髓細胞微核數增高是一次性全身γ射線照射引起輻射損傷的表現之一，在一定范圍內，照射劑量與骨髓細胞微核率成正比，恢復時間與骨髓細胞微核率成反比，骨髓細胞微核數可代表機體染色體受損的狀況。具有輻射危害輔助保護作用的受試物對受輻射損傷機體的遺傳系統具有防護作用。 3.2 儀器和試劑

解剖器械，生物顯微鏡，載玻片等。

小牛血清：小牛血清濾菌后放入56℃恒溫水浴保溫1h進行補體活性滅活。－20℃保存。亦可用大、小鼠血清代替。

Giemsa染液及應用液

1/15mol/L磷酸鹽緩沖液（PH6.8） 甲醇（分析純） 3.3 實驗方法

3.3.1 實驗動物：小鼠，體重18－22g，單一性別，每組10－15只。 3.3.2劑量分組及受試樣品給予時間

實驗設三個劑量組和一個輻射模型對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品于照射前給予14－30天，照射后仍然給予受試物，必要時可適當延長至45天。

3.3.3 實驗步驟：

受試樣品組于照射前后經口連續給予受試樣品，劑量組與輻射模型對照組均以同一劑量γ射線全身照射一次，照射劑量宜選擇3Gy－5Gy。于照射后第3天，頸椎脫臼處死動物，取胸骨或股骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常規涂片。或用小牛血清沖洗股骨骨髓腔制成細胞懸液涂片，涂片自然干燥后，放入甲醇中固定5－10min，放入Giemsa應用液中，染色10－15min，立即用磷酸鹽緩沖液或蒸餾水沖洗，晾干。鏡檢，每只動物計數1000個嗜多染紅細胞中微核細胞數，微核率以千分率表示。

抑制率計算：????????????? C－D

A（％）＝────── ×100％????????????? C－E 式中 A－抑制率

???? C－致突變物對照組微核率????? D－受試樣品組微核率????? E －陰性對照組微核率 3.4 數據處理及結果判定

采用卡方檢驗、泊松分布或方差分析等統計方法進行數據處理。

輻射模型對照組與陰性對照組骨髓細胞微核率進行兩樣本均數的成組雙側t或t’檢驗，差異具有顯著性，則判定輻射損傷模型成立。

任一劑量組微核率低于輻射模型對照組微核率，差異有顯著性，可判定該實驗結果陽性。?

4.血／組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性實驗 4.1 原理

血／組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性降低是一次性全身γ射線照射引起輻射損傷的表現之一，在一定范圍內，照射劑量與血／組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性成反比，恢復時間與血／組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性成正比，血／組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性可代表機體氧化還原反應系統受損的狀況。具有輻射危害輔助保護作用的受試物對受輻射損傷機體的氧化還原系統具有防護作用。

O2－氧化羥基的*終產物為亞硝酸鹽，后者在對氨基苯磺酸及甲萘胺作用下呈現紫紅色，在波長530nm處有*大吸收峰，可用分光光度法進行測定，當SOD消除O2－

后形成的亞硝酸鹽減少。 4.2儀器與試劑

儀器?721分光光度計、離心機、恒溫水浴、勻漿器 試劑

??? 65mM磷酸鹽緩沖液(PBS) pH7.8、SOD標準品、三氯甲烷、95％乙醇(v/v)、0.9%生理鹽水 10mmol/L鹽酸羥胺

???????? 鹽酸羥胺6.95mg，加PBS至10mL 7.5mmol/L黃嘌呤

???????? 黃嘌呤11.41mg，加0.1M NaOH 2.5mL溶解，加PBS至10mL 0.2mg/mL黃嘌呤氧化酶

???????? 取10mg/mL黃嘌呤氧化酶0.2mL加冰冷PBS 9.8mL至10mL 0.1%甲萘胺

取0.2gα-甲萘胺溶于40mL沸蒸餾水，涼至室溫加50mL冰醋酸，再加110mL涼蒸餾水至200mL 0.33%對氨基苯磺酸

取0.66g對氨基苯磺酸溶于150mL溫蒸餾水，加50mL冰醋酸至200mL 4.3 實驗方法

4.3.1 實驗動物：小鼠，體重18－22g，單一性別，每組10－15只。 4.3.2劑量分組及受試樣品給予時間

實驗設三個劑量組和一個輻射模型對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品于照射前給予14－30天，照射后仍然給予受試物，必要時可適當延長至45天。 4.3.3實驗步驟