隨著生物技術的迅猛發展、基因工程技術已在農業領域中得到廣泛運用。自二十世紀八十年代以來以基因改良為核心的農業生物技術正掀起第二次綠色革命。運用轉基因技術(Gene transfer)能培育出優質、高產、抗病蟲害、抗逆的優良品種，以緩解由于人口迅速增長、可耕地的減少、資源短缺、環境惡化而帶來的農牧產品和食品短缺的危機。以農作物為例〔1〕自1994年**例轉基因延熟西紅柿在美國批準上市以來，全球轉基因作物種植面積迅猛擴大，由1996年的170萬公頃增長到2002年的5870萬公頃。轉基因作物產品的全球銷售額由1995年的0.75億美元、1999年激增到21～23億美元,預測2005年將達到80億美元，2010年將突破250億美元〔2〕。

　　轉基因食品的檢測方法

　　鑒于全世界對轉基因食品的安全性引起的關注和激烈爭論，對轉基因食品的檢測顯得尤為重要。基因工程技術是將克隆的外源基因通過基因槍法、農桿菌介導法等方法轉入目的農作物中、使目的農作物中具有外源基因所具有的優良性狀。對轉基因食品的檢測、從轉基因技術本身來分析、可從基因水平、基因轉錄水平和基因翻譯產物水平進行。

　　1. 基因水平的檢測

　　轉基因技術將從各種生物中克隆出來的目的基因片斷插入到靶向受體中時，一般要構建啟動子、終止子、選擇標記基因、報告基因等。從基因水平進行轉基因的檢測就是要檢測受體的核酸序列、目的片斷的整合位點、基因多態性、目的片斷的含量分析以及啟動子、終止子、選擇標記基因、報告基因等。

　　聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction) PCR法〔10〕

　　對報檢的樣品運用PCR儀，針對外源基因設計合適的引物，通過TaqDNA酶的聚合快速特異地擴增目的基因片段，使目的基因片斷以數量級速度在體外得到擴增從而可以在短短的幾小時內使Pg水平的特異外源DNA片段擴增到ng乃至ug水平，擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯酞胺凝膠電泳，用溴化乙錠(EB)染色，在紫外光下就可觀察到外源目的片斷。

　　(1) 定性PCR法

　　定性PCR可直接檢測啟動子、終止子、標記基因片斷、目的基因片斷。為使目的基因很好的進行表達，在構建基因表達載體時常在目的基因的5’和3’端分別加上啟動子和終止子。當前大約75%的轉基因植物中使用Ca MV( Cauliflower mosaicvirus) 3 5 S啟動子，其次是胭脂堿和章魚堿合成酶的NOS啟動子和Ocs啟動子。常用的終止子是胭脂堿合成酶的NOS終止子和Rubisco小亞基基因的3’端區域、所以當前對啟動子和終止子的檢測實際上是對Ca MV35S啟動子和NOS終止子的檢測。然而一些植物如十字花科植物易被CaMV感染而攜帶35S，故檢測出陽性信號;而NOS終止子來源于普遍存在的農桿菌(Agrobacterium tume faciens )，因此，用PCR對35S啟動子和NOS終止子進行檢測時應配合其他檢測。定性PCR受DNA抽提和純化的影響，如果DNA降解或受污染，檢測結果就會出現假陽性現象;只能初步確定是否為GMF但不能鑒定是哪種GMF。

　　(2) 定量PCR法

　　在實際貿易和食品消費中我們不僅想知道食品是否是轉基因的，而且還想知道其中外源基因的含量，即外源基因占GMF的百分含量。在普通的定性PCR擴增過程中，以不同濃度標準陽性樣品作參照，標準陽性物用基因工程方法合成，上游引用熒光標記，下游引物不標記，在模板擴增的同時，標準陽性物也被擴增。。*后根據吸光值作出吸光值與轉基因含量的標準曲線圖，以此可以確定檢測樣品的轉基因含量，這樣可以進行半定量檢測。

　　(3) 定量競爭性 QC一PCR法(Quantitative competitive PCR)

　　在PCR的反應管中，同時放入用人工合成用熒光標記的模板和待測樣品讓兩者對同一引物同時擴增，反應完成后通過測定熒光強度推測待測樣品的DNA含量。

　　(4) 實時定量熒光PCR法〔11〕

　　實時定量熒光PCR技術是在常規PCR基礎上，添加一條熒光標記基因探針(一般為Taq man)。一個標記在探針的5'端，一個標記在探針的3'端，兩者構成能量傳遞結構，兩個熒光集團根據距離控制是吸收或抑制，在PCR不斷擴增中不斷檢測反應體系中熒光信號的變化，通過記錄循環次數和PCR體系中起始DNA量的對數值之間的線性關系確定起始DNA的量。用實時定量熒光PCR對轉基因食品進行檢測可避免普通PCR反應過程中由于外界污染或樣品本身DNA降解等原因造成的假陽性結果，但是實時定量熒光PCR儀價格昂貴，檢測費用高。

　　(5)反轉錄RT-PCR法

　　反轉錄PCR克服了待檢樣品中外源基因含量特別微量，以mRNA為模板反轉錄成cDNA，再通過PCR擴增進行檢測。

　　(6) PCR—ELISA法

　　PCR一ELISA是I種將PCR高效性與ELISA高特異性結合在一起的轉基因檢測方法。利用共價交聯在PCR管壁上的寡核普酸作為固相引物，在Taq酶作用下，以目標核酸為模板進行擴增，產物一部分交聯在管壁上，為固相產物，一部分游離于液體中，為液相產物。對于固相產物，可用標記探針與之雜交，再用堿性磷酸酷酶標記的鏈親和素進行ELISA檢測，同時可通過凝膠電泳對液相產物進行分析。將PCR和ELISA兩種方法相結合，可以相互取長補短，使檢測的準確性大大提高。目前在我國尚未建立統一完備的轉基因食品的篩選方法，隨著轉基因食品的數量增多及我國加入世界貿易組織，在我國建立轉基因食品的篩選方法將對人群健康及生態環境的保護起積*的作用。