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大腸埃希菌O157的ISO方法解讀

作者:Lance 時間:2022-10-13 來源:互聯(lián)網(wǎng)

大腸埃希菌O157作為食品致病菌,早就引起人類的注意。2001年,ISO發(fā)布了ISO16654:2001食品和動物飼料微生物學(xué)大腸埃希菌O157檢測的水平方法,對食品和飼料中的E.coliO157檢測,給出了標(biāo)準(zhǔn)方法。
O157是E.coli的血清型。我國標(biāo)準(zhǔn)要求在牛肉制品和生食果蔬制品中不得檢出。在ISO16654:2001中,E.coliO157的檢測分為四步:
1)增菌。采用含新生霉素的改良型TSB肉湯,41.5℃孵育6h,再緊接著孵育12-18h;
2)分離和富集。需要采用針對O157的抗體包被的免疫磁珠;
3)檢出:采用CT-SMAC平板和另一款原理不同的選擇性分離瓊脂
4)驗證:對CT-SMAC平板上的山梨醇陰性菌落和第二款選擇性分離瓊脂上的E.coliO157典型菌落,通過吲哚試驗和E.coliO157抗血清的凝集試驗進(jìn)行驗證。
增菌階段,ISO推薦用Modifiedtryptonesoyabroth,即改良型TSB肉湯,對此,HIMEDIA生產(chǎn)有SoyabeanBileBrothBase(貨號M1286)和新生霉素添加劑(貨號FD290),配方和ISO推薦的改良型TSB肉湯完全一致,可以采用。
對于CT-SMAC瓊脂,HIMEDIA也生產(chǎn)有相應(yīng)培養(yǎng)基(貨號M1340,加添加劑,貨號為FD147),培養(yǎng)結(jié)果見上圖。O157為無色菌落。但不排除假陽性,如假單胞菌在此培養(yǎng)基中也可產(chǎn)生無色菌落。此時可進(jìn)行氧化酶試驗,在5-10秒內(nèi)觀察結(jié)果。假單胞菌為陽性,而O157為陰性。
同時,ISO16654:2001也指出,存在山梨醇陽性的E.coliO157不會被CT-SMAC平板檢測到。因此推薦同時使用另外一款選擇分離培養(yǎng)基。此時可考慮HIMEDIA的另外一款O157選擇性瓊脂(顯色培養(yǎng)基),貨號為MV157**,品名為HiCromeECO157:H7SelectiveAgarBase,Modified,配合添加劑(貨號FD187)一起使用。其檢測效果見下圖。E.coliO157:H7能旺盛生長,菌落呈深紫色,而普通E.coli呈藍(lán)綠色。
培養(yǎng)基添加劑中的亞碲酸鉀能抑制氣單胞菌和普羅威登菌生長,新生霉素抑制革蘭陽性菌,月桂基硫酸鈉抑制伴隨的革蘭陽性菌群。
在驗證階段,ISO也提示,發(fā)現(xiàn)存在吲哚陰性的突變菌。因此,也可以考慮用qPCR或多種生化鑒定的方式進(jìn)行驗證。

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