作者:banjian77 時間:2022-10-18 來源:互聯(lián)網(wǎng)
狂犬病毒檢測病毒分離操作,是將狂犬病抗原檢測或核酸檢測陽性標本可以進一步進行病毒分離以便進行更深入的研究。分離方法如下:
細胞培養(yǎng)法分離病毒:將唾液、腦脊液、皮膚或腦組織標本研磨后,用 PBS 或 MEM 制成 30%懸液→4℃ 2000r/min 離心 20 分鐘→取上清接種在 96 孔或 24 孔培養(yǎng)板內(nèi)已形成單層的敏感細胞(鼠神經(jīng)傳代細胞、Vero 細胞或 BHK21 細 胞)上,吸附 2 小時后補加含 2%血清的維持液,37℃ 5%C02 孵育約 4~5 天, 丙酮固定感染后的細胞,用抗狂犬病毒單克隆抗體觀察特異性熒光包涵體判斷 結(jié)果。
陽性時吸取上清至一無菌容器內(nèi)-70℃保存?zhèn)溆没蚶^續(xù)傳代。病毒通過細 胞的多次傳代可以適應(yīng)細胞培養(yǎng)并得到擴增。
乳小白鼠接種法分離病毒:30%的病人或動物腦組織懸液,離心取上清,接種 1~2 日齡乳鼠腦內(nèi),每個樣品注射一窩乳鼠;注射后的乳鼠應(yīng)在具有高效濾過 裝置的負壓飼養(yǎng)柜內(nèi)飼養(yǎng)。癥狀不典型時可于接種**代后取腦繼續(xù)傳代,連續(xù)傳代后潛伏期逐漸規(guī)律,一般為 5天左右。
發(fā)病乳鼠若確定為狂犬病毒感染,無菌取腦,-70℃或用含 50%甘油的 PBS -20℃保存,也可研磨后加滅菌脫脂牛 144 奶制成 20%懸液,真空冷凍干燥,長期保存。未發(fā)病存活的鼠保留至 21 天后 殺死作免疫熒光檢測
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