范圍

本標準規定了化學品魚類延長毒性14天試驗的方法概述、試驗準備、試驗程序、質量保證與質量控制、數據與報告。

本標準只適用于化學品對淡水魚類延長毒性14天的試驗。

對于實驗條件下溶解度有限的化學品，也許不一定能確定本標準希望測定的值。

若更長的觀察期是有用而適宜的，并且有必要提供包含其他更多信息的測試報告，則本標準也許可以替代魚的急性毒性測試。

術語和定義

下列術語和定義適用于本標準。

半靜態試驗semi-static test

以定期更換試驗介質方式(如12 h或24 h)進行的試驗。

流水式試驗flow-through test

以受試物溶液恒流通過試驗容器使試驗介質持續更新的方式進行的試驗。

致死效應閾值threshold level of lethal effect

受試物產生致死效應的*低濃度。

可觀察效應閾值threshold level of observed effects

試驗溶液中受試物表現出除致死效應外其他效應的*低受試物濃度。

無可觀察效應濃度no observed effect concentration;NOEC 與對照相比，對試驗生物未產生顯著效應的*高受試物濃度。

受試物信息

純度;

水溶液中的定量分析方法;

在水中和光中的穩定性;

正辛醇一水分配系數;

快速生物降解試驗結果。

方法概述

1原理

測試期間，定期測定魚類致死效應、其他可觀察效應濃度和無可觀察效應濃度(NOEC)，試驗進行

14 do必要時再延長1周、2周。

2參比物

本標準無推薦參比物。若測試了某一參比物，應在測試報告中加以說明。

儀器設備

實驗室常規儀器設備，特別是以下儀器設備是必需的：

a)測定水質溫度、pH、溶解氧和硬度的儀器;

b)溫度控制儀;

c)化學惰性材料制成的容積適宜的實驗容器。

試驗準備

1系統選擇

試驗期間，應盡可能維持條件恒定。通常采用流水式試驗系統，若適合，也可采用半靜態試驗系統。

2受試生物

2.1受試生物的選擇

可選用一個或多個魚種，取決于測試實驗室。但建議選擇魚類急性毒性試驗中所推薦的魚種，見附錄AO選擇魚種應基于幾個重要的標準，如，全年的易獲得性、易于飼養、方便進行測試、價格低廉、以及生物的和生態的因素等。選擇的魚應健康，無任何可見畸形。

這些魚可以由漁民或實驗室飼養，疾病和寄生蟲得到控制，這樣健康狀況得以保證，出身可知。

若采用推薦魚種之外的符合上述條件的其他魚種，須說明理由，按相應的試驗條件改編試驗方法，寫人試驗報告。

2.2試驗生物的馴養

至少12 d、15 do所有試驗魚使用前，須在與試驗用水相同的水質中馴養至少7dO應避免任何可能改變試驗魚行為的干擾因素。

光照：每天12 h、16 h光照。

溫度：適合于試驗魚種。

溶解氧：不低于80%空氣飽和值。

疾病處理：避免進行疾病處理，如有處理應報告。

飼喂：1次/do

馴養48 h后，記錄死亡率，并按下列標準處理：

7 d內死亡率大于10%，舍棄全組魚;

一一死亡率在5%、10%之間，繼續馴養7 d; 死亡率小于5%，該組魚可用于試驗。

3試驗用水

3.1水質

可用飲用水(必要時除氯)、高質量的天然水或配制的稀釋水，見附錄B.水的總硬度為50 mg/L—

250 mg/L(以caC03計) 'PH值為6 · 0、8· 5。用于配制稀釋水的試劑應為分析純，去離子水或蒸餾水的電導率應小于或等于10 μS/cm

3.2試驗溶液

將適量受試物溶于所需體積的稀釋水中，制成適當濃度的受試物貯備液。

低水溶性受試物的貯備液可用機械分散法制備，或必要時采用對魚低毒的有機溶劑、乳化劑、分散劑等。這類溶劑在試驗溶液中的濃度應不超過100 mg/LO 通過稀釋貯備液來配制所選濃度的試驗液。

試驗溶液的pH值不需調節。若加人受試物后試驗溶液的pH值有明顯變化，建議重新配制，調整貯備液的pH值至與加受試物前試驗液的pH值相同。用于調節pH值的物質不應使貯備液的濃度有明顯改變，也不應與受試物發生化學反應或產生沉淀。*好使用HCI或NaOH來調節pH值。

試驗程序

1試驗濃度

選擇的試驗濃度，應能確定受試物的致死效應、其他可觀察效應的閾值和無可觀察效應的濃度值。

若閾值水平超過100 mg/L，不需進行測試。

如果使用助溶劑，應加設溶劑對照組，對照中溶劑濃度應為試驗液中溶劑的*高濃度。

2暴露條件

周期：試驗周期一般為14 d，也可延長1周、2周。

承載量：半靜態試驗的*大承載量為1 · 0 g/L;流水試驗系統的承載量可高一些。試驗容器的容量應與推薦的承載量相適應。

試驗生物數：每一濃度組和對照組至少使用10尾魚。

d) 光照：每天光照12 h、16 ho

e) 溫度：試驗溫度與試驗魚種相適應，保持恒定，溫度變化范圍為± 2 ℃。

溶解氧：試驗期間，試驗液溶解氧含量不低于60%空氣飽和值。

飼喂：每日投餌一次或多次，投食量恒定，每次投食量不得超過試驗魚一次需食量。

清污：流水式試驗系統，每周至少清洗試驗水箱內壁兩次;半靜態試驗，可在每次更換試驗液時清理一次。

3觀察測定

觀察和記錄魚的死亡情況，當觀測到魚沒有呼吸運動或觸碰魚尾無反應，可判斷魚已死亡，將死魚從容器中取出，記錄死亡數，每天檢查一次。

觀察和記錄其他非致死效應，包括與對照組魚明顯不同的表征、大小和行為，異常游泳行為，外來刺激的不同反應，魚類外觀上的改變，攝食下降或停止，體長和體重改變等。

每周三次記錄所有可觀察效應。

每周兩次測定各容器的溶解氧含量、pH值和溫度。

濃度測定：流水試驗，試驗開始時測定試驗液中受試物濃度;半靜態試驗，試驗開始時、**次更新試驗液前和試驗結束時分別測定試驗液中受試物濃度。若能證明可以維持足夠高的受試物濃度，也可采用化學分析之外的其他適合的程序。

試驗開始前，選擇試驗魚中有代表性的個體，測量體重和體長。試驗結束時，測定所有存活魚的體重和體長。

質量保證與質量控制

a)試驗結束時，對照組的死亡率不高于10%;

b)試驗期間，試驗液的溶解氧含量不低于60%空氣飽和值;

c)采用半靜態試驗系統時，若不會造成受試物的明顯損失，則可對試驗液充氣;

d)應有證據證明試驗期間受試物濃度維持在較高的水平(受試物濃度應不低于80%配制濃度)。

若與配制濃度的偏差大于20%，測試結果應以實測濃度為準。

數據與報告

1結果解釋

如果發現未能維持受試物試驗液的穩定性和同質性，應慎重解釋所得結果，并注明該試驗結果不能重現。

2試驗報告

試驗報告應包括下述內容： a) 受試物：化學鑒定數據。

b) 受試生物：學名、品系、大小、供應商、預處理等。

c) 試驗條件：

一一采用試驗操作：如半靜態或流水式，曝氣、承載量等;

一一水質特征：水質處理情況，包括除氯、溶解氧濃度、pH、硬度、溫度等;

一一每一推薦觀察時間試液中的溶解氧濃度、pH、溫度和總硬度;

一一制備貯備液和試驗液的方法;

一一試驗液中受試物的濃度及保持情況;

一一各試驗濃度組中魚的數量;

一一魚類急性毒性試驗數據。

d) 結果：

一一用表列出每一觀察時間各濃度組的可觀察效應;

一一繪制產生致死效應或其他效應的濃度隨時間變化的曲線;一一一致死效應閾值;

一一可觀察效應閾值;

一一無可觀察效應濃度(NOED;

一一如可能，每一推薦觀察時間各濃度組的累積死亡率;一一對照組的死亡率;

一一魚的行為觀察;

一一試驗期間對試驗結果可能產生影響的事件;一一與本標準的任何偏離。

水中溶解度;

b) 蒸氣壓;

c) 結構式;