PCA-1/ALKBH3抑制劑(HUHS015)檢測
作者：荀彧 時間：2022-12-05 來源：互聯網
培養操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PCA-1/ALKBH3抑制劑(HUHS015) | HUHS015 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1～3天 |
商品介紹：
HUHS015在體內體外都是PCA-1/ALKBH3強有力的抑制劑，持續的注射HUHS015能夠顯著的抑制DU145細胞的生長。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1453097-13-6 純度：99.77% 分子量：318.37 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，*后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，*后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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PCA-1/ALKBH3抑制劑(HUHS015)L-天門冬鈣
其他L-天冬鈣；生力鈣
英文名稱：L-Aspartic acid calcium salt
產品規格：BR，99%
包裝：25克/100克/1公斤
CAS號：39162-75-9
C8H12CaN2O8=304.27
級別：BR
含量：≥99.0%
鈣含量：12.6～13.8%
PH：6.0～8.0
比旋光度：+21.8～+23.0°
干燥失重：≤0.25%
氯化物：≤200mg/kg
硫鹽：≤500mg/kg
銨鹽：≤200mg/kg
鐵：≤30mg/kg
重金屬：≤10mg/kg
砷鹽：≤1mg/kg
性狀：結晶或結晶粉末
用途：生化研究
保存：RT
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