公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測定

注意事項

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)試劑盒 木蘭脂素庚乙酯 ≥99%, FCC, FG苯葉酯 97%，Kosher

抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)試劑盒 木栓庚乙酯 AR,98.5%葉酯 97%

抗肺泡底膜抗體(ABM-Ab)試劑盒 木糖辛乙酯 Standard for GC,>99%(GC)葉酯 97%，Kosher

抗肺泡底膜抗體(ABM-Ab)試劑盒 木通苯乙苷B辛乙酯 99%異丁葉酯 97%

抗胸腺球蛋白(ATG)試劑盒 木通苯乙苷B辛乙酯 ≥99%, FCC, FG異丁葉酯 97%， Kosher

抗胸腺球蛋白(ATG)試劑盒 木犀草苷丁乙酯 GCS，≥99.5% (GC) 異戊葉酯 97%

抗表皮底膜抗體(EBMZ)試劑盒 木犀草素丁乙酯 99%異戊葉酯 97%,FCC

抗表皮底膜抗體(EBMZ)試劑盒 木犀草素-5-O-葡萄糖苷丁乙酯 ≥99%, FCC乳葉酯 98%

抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒 木香烴內(nèi)酯丁乙酯 分析標準品乳葉酯 98%，Kosher

抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒 耐斯糖乙酯 GCS,≥99.5% (GC) 戊葉酯 97%

抗白蛋白抗體(AAA)試劑盒 鬧羊花素ＩＩ乙酯 CP，98%戊葉酯 97%， Kosher

抗白蛋白抗體(AAA)試劑盒 鬧羊花素III乙酯 AR，99%葉酯 97%

抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)試劑盒 鬧羊花素V乙酯 分析標準品，≥99.7% (GC)葉酯 97%，Kosher

抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)試劑盒 尼泊金異酯乙酯 ≥98%, FCC, FG柳葉酯 97%

抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)試劑盒 尼泊金異丁酯乙酯 GCS，≥99.5% (GC)柳葉酯 ≥97%, Kosher

抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)試劑盒 尼莫地平乙酯 99%α-己肉桂 92%
硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒A型流感病核衣殼蛋白抗體雪膽素（標準品） GSK-2636771

A型流感病核衣殼蛋白抗體雪膽素乙 N-Cbz-L-threonine Benzyl Ester

B型流感病蛋白抗體雪上一支蒿（標準品） (+)-2-Methyl-L-serine

人類狀瘤病16-E7抗體雪上一枝蒿素(標準品) 3,3-Diphenyl-L-alanine

跨膜蛋白絲氨1抗體血根(標準品) α-Methyl-L-phenylalanine

肺癌癌因蛋白3抗體血竭(麒麟竭)（標準品） L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride

高密度脂蛋白抗體血竭素高鹽(標準品) L-Cysteine methyl ester hydrochloride

蛋白激底物相關蛋白抗體鴉膽子（標準品） Glycine methyl ester hydrochloride

艾滋病病抗體鴉膽子苦(標準品) L-Glutamic acid dimethyl ester hydrochloride

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × ****

如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × ****

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。