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微生物檢測過程中的細(xì)節(jié)問題

作者:百檢網(wǎng) 時間:2021-09-30 來源:互聯(lián)網(wǎng)

微生物檢測過程中的細(xì)節(jié)問題

  一、稀釋液的制作磷酸鹽緩沖稀釋液
  貯存液:
  磷酸二氫鉀(KH2PO4)34.0g;蒸餾水500mL;用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2(圖1-1、1-2),用蒸餾水稀釋至1000
  mL后貯存于冰箱。
  稀釋液:
  用蒸餾水稀釋1.25ml貯存液至1000mL,分裝于合適容器,121℃高壓滅菌15min。

  二、培養(yǎng)基制作
  ①計算出所需數(shù)量,用電子稱、稱量紙、藥勺來稱取。
  ②放入比所用蒸餾水大的燒瓶中,使之充分混勻于蒸餾水后加熱溶解并煮沸。
  備注:即使是同一培養(yǎng)基,各個廠家的配制方法多少有些不同,所以一定要充分參照培養(yǎng)基上的說明。
  2.1傾注培養(yǎng)培養(yǎng)基:
  平板計數(shù)瓊脂等:高壓滅菌后保存,使用時加溫溶解。去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基:使用時將培養(yǎng)基粉未加溫溶解。
  *備注:傾注培養(yǎng)時,向培養(yǎng)基分注的步驟參照下述的注意事項:
  ①樣液稀釋以及從接種到培養(yǎng)基混合完畢,*好在15分鐘以內(nèi)完成。
  ②每個平皿的分注量約15-20ml。分注后將平皿傾斜和旋轉(zhuǎn)使之充分混合,但要注意不要讓培養(yǎng)基從平皿內(nèi)溢出,且不要粘附在平皿壁和蓋上。
  ③分注時三角燒瓶掛有培養(yǎng)基滴時,下一次分注的培養(yǎng)基可能被燒瓶外壁的細(xì)菌污染,所以要用酒精棉擦拭,再將瓶口用火焰滅菌。
  2.2平板培養(yǎng)基:
  平板培養(yǎng)基是將溶解后的培養(yǎng)基分注15-20ml到無菌平皿里,使之凝固。
  TCBS瓊脂培養(yǎng)基、DHL瓊脂培養(yǎng)基;加溫溶解后,分注、凝固、干燥表面。為了防止沉淀的發(fā)生,加溫溶解后要充分混勻(注意不要起泡)。
  EMB瓊脂培養(yǎng)基:高壓滅菌后,分注、凝固、干燥表面。
  卵黃甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基:將雞蛋放在95%酒精中浸泡1小時左右,用酒精棉(紗布)擦拭蛋殼表面,打開雞蛋取出卵黃。加入經(jīng)高壓滅菌后冷卻到55-60℃培養(yǎng)基里(6%卵黃)攪拌搖勻凝固后干燥表面(攪拌時不要起泡)。若培養(yǎng)基溫度過高,卵黃凝固,過低則培養(yǎng)基分注時開始結(jié)塊,所以操作要迅速。
  *備注:分注后將平皿蓋打開置于無菌工作臺/恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)使培養(yǎng)基表面干燥。
  干燥時間基準(zhǔn)如下:
  無菌超凈臺:15分鐘;
  37C恒溫箱內(nèi)倒置:20-30分鐘。

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