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微生物常規(guī)鑒定技術(shù)

作者:百檢網(wǎng) 時間:2021-09-30 來源:互聯(lián)網(wǎng)

微生物常規(guī)鑒定技術(shù)
(一)形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察

1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色,在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細(xì)胞結(jié)構(gòu)(包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性進(jìn)行觀察,直觀地了解細(xì)菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性,根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達(dá)到區(qū)別、鑒定微生物的目的。
2、細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細(xì)胞群體叫菌落(colony)。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖,所形成的菌落特征有很大差異,而同一種的細(xì)菌在一定條件下,培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此,微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。

(二)生理生化試驗
微生物生化反應(yīng):指用化學(xué)反應(yīng)來測定微生物的代謝產(chǎn)物,生化反應(yīng)常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。因此微生物生化反應(yīng)是微生物分類鑒定中的重要依據(jù)之一。
微生物檢驗中常用的生化反應(yīng)有:
1、糖酵解試驗
不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異,或能利用或不能利用,能利用者,或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣。可用指示劑及發(fā)酵管檢驗。
2、淀粉水解試驗
某些細(xì)菌可以產(chǎn)生分解淀粉的酶,把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再變藍(lán)色。
3、v-p試驗
某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸縮合,脫羧成乙酰甲基甲醇,后者在強(qiáng)堿環(huán)境下,被空氣中氧氧化為二乙酰,二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物,稱v-p(+)反應(yīng)。
4、甲基紅(methyl red)試驗
腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖,在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸,進(jìn)一步分解中,由于糖代謝的途徑不同,可產(chǎn)生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物,可使培養(yǎng)基ph值下降至ph4.5以下,使甲基紅指示劑變紅。
5、靛基質(zhì)(imdole)試驗
某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合,形成玫瑰吲哚,為紅色化合物。
6、硝酸鹽(nitrate)還原試驗
有些細(xì)菌具有還原硝酸鹽的能力,可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗。
7、明膠(gelatin)液化試驗
有些細(xì)菌具有明膠酶(亦稱類蛋白水解酶),能將明膠先水解為多肽,又進(jìn)一步水解為氨基酸,失去凝膠性質(zhì)而液化。
8、尿素酶(urease)試驗
有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶,將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導(dǎo)酶,因為不論底物尿素是否存在,細(xì)菌均能合成此酶。其活性*適ph為7.0。
9、氧化酶(oxidase)試驗
氧化酶亦即細(xì)胞色素氧化酶,為細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶,氧化酶先使細(xì)胞色素c氧化,然后此氧化型細(xì)胞色素c再使對苯二胺氧化,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。
10、硫化氫(H2S)試驗
有些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸或含硫化合物,而產(chǎn)生硫化氫氣體,硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物。
11、三糖鐵(TSI)瓊脂試驗
本試驗可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣(變黃);產(chǎn)生硫化氫(變黑)。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃,但因量少,生成的少量酸,因接觸空氣而氧化,加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì),生成堿性產(chǎn)物,故使斜面后來又變紅,底部由于是在厭氧狀態(tài)下,酸類不被氧化,所以仍保持黃色。
12、硫化氫-靛基質(zhì)-動力(sim)瓊脂試驗
以接種針挑取菌落或純養(yǎng)物穿刺接種約1/2深度,置361℃培養(yǎng)18~24h,觀察結(jié)果。培養(yǎng)物呈現(xiàn)黑色為硫化氫陽性,混濁或沿穿刺線向外生長為有動力,然后加Kovacs氏試劑數(shù)滴于培養(yǎng)表面,靜置10min,若試劑呈紅色為靛基質(zhì)陽性。培養(yǎng)基未接種的下部,可作為對照。本試驗用于腸桿菌科細(xì)菌初步生化篩選,與三糖鐵瓊脂等聯(lián)合使用可顯著提高篩選功效。
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