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NY/T 2278-2012 靈芝產(chǎn)品中靈芝酸含量的測定 高效液相色譜法 檢測標(biāo)準(zhǔn)

作者:百檢網(wǎng) 時(shí)間:2021-11-15 來源:互聯(lián)網(wǎng)

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了靈芝及其制品中靈芝酸A和靈芝酸B的高效液相色譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于靈芝及其制品靈芝酸A和靈芝酸B的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)靈芝酸A和靈芝酸B的定量測定范圍均為30mg/kg~500mg/kg。

本標(biāo)準(zhǔn)靈芝酸A和靈芝酸B的檢測限均為10mg/kg。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3 原理

試樣中靈芝酸A和靈芝酸B用甲醇超聲提取,提取液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊蠹状既芙猓咝б合嗌V法測定,以保留時(shí)間進(jìn)行定性,外標(biāo)法定量。

4 試劑

除非另有規(guī)定,僅使用色譜純試劑和符合GB/T 6682 中規(guī)定的一級水。

4.1 甲醇(CH3OH)。

4.2 甲酸(CH2O2)。

4.3 乙腈(CH3CN)。

4.4 0.1%甲酸水溶液:取1m甲酸(4.2)定容至1L。

4.5 靈芝酸A(CAS號81907-62-2)和靈芝酸B(CAS號81907-61-1):純度≥96%。

4.6 標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取靈芝酸A(4.5)和靈芝酸B(4.5)標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.1mg),用甲醇定容至10mL。該混合標(biāo)準(zhǔn)液中靈芝酸A和靈芝酸B的質(zhì)量濃度均為1000μg/m,-18℃冰箱保存,有效期3個(gè)月。

5 儀器和設(shè)備

5.1 高效液相色譜儀,配紫外檢測器或二*管陣列檢測器。

5.2 超聲波清洗器,功率大于450W,頻率50Hz~100Hz。

5.3 分析天平,感量0.01g和感量0.0001g。

5.4 有機(jī)系濾膜,0.45μm。

5.5 樣品粉碎機(jī)。

5.6 氮?dú)獯蹈蓛x。

6 分析步驟

6.1 試樣制備

取不少于200g具代表性靈芝子實(shí)體,用樣品粉碎機(jī)(5.5)粉碎(超細(xì)粉等無需粉碎),將樣品裝于密封容器中,制成待測樣,0℃~20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

6.2 試樣提取

稱取粉碎均勻的試樣0.5g(精確至0.001g)于50mL離心管中,加甲醇(4.1)25mL搖勻,置于超聲波清洗器(5.2)中超聲提取30min,提取液經(jīng)濾紙過濾,取濾液5mL置于10mL刻度試管中,于50℃左右氮?dú)獯蹈桑瑲埩粑镉?.0mL甲醇(4.1)溶解,過濾膜(5.4),供高效液相色譜儀分析。

6.3 測定

6.3.1 色譜參考條件

色譜柱:C18柱,250mm×4.6mm(i.d.),5μm,或相當(dāng)規(guī)格色譜柱。

流動(dòng)相:乙腈(4.3)+0.1%甲酸水溶液(4.4)=30+70

流速:1.0mL/min。

柱溫:40℃。

波長:258nm。

進(jìn)樣量:20μL。

6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確吸取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.6)用甲醇稀釋,配制質(zhì)量濃度為1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/m、20.0μg/mL和50.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液,按參考色譜條件測定,以靈芝酸A和靈芝酸B的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算線性回歸方程。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見圖A.1。

6.3.3 測定

按照保留時(shí)間進(jìn)行定性,樣品與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對偏差不大于2%,單點(diǎn)或多點(diǎn)校正外標(biāo)法定量。待測樣液中靈芝酸A和靈芝酸B的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

7 結(jié)果計(jì)算

試樣中靈芝酸A和靈芝酸B的量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)a計(jì),單位以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)計(jì)算。

w=A*p*V/(As*m)*f

式中:

A——試樣中靈芝酸A或靈芝酸B的峰面積;

As——標(biāo)準(zhǔn)工作液中靈芝酸A或靈芝酸B的峰面積;

p——標(biāo)準(zhǔn)工作液中靈芝酸A或靈芝酸B的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(pg/mL);

V——試樣液*終定容體積,單位為毫升(mL);

m——試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

f——樣品稀釋倍數(shù)。

以兩次平行測定值得算數(shù)平均值作為測定結(jié)果,計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

8 精密度

8.1 重復(fù)性

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的**差值不大于這兩個(gè)測定值的算術(shù)平均值的5%。

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