什么是體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)？

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)是一種在離體狀態(tài)下模擬生物體生長環(huán)境，檢測醫(yī)療器械及生物材料接觸機(jī)體組織后所發(fā)生的細(xì)胞溶解、抑制細(xì)胞生長和其他毒性作用的體外試驗(yàn)。體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)是醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)體系中*重要的檢測指標(biāo)之一，幾乎也是醫(yī)療器械及生物材料臨床應(yīng)用前的必選項(xiàng)目

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)依據(jù)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

ISO 10993-5:2009 Biological Evaluation of Medical Devices -Part 5: Tests for in vitro Cytotoxicity

GB/T16886.5-2007醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)?第5部分：體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)，GB/T16886是由ISO 10993轉(zhuǎn)化過來的標(biāo)準(zhǔn)

GB/T 16175-2008? 醫(yī)用有機(jī)硅材料生物學(xué)評價(jià)試驗(yàn)方法

GB/T 14233.2-2005 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分：生物試驗(yàn)方法

YY/T0127.9-2009口腔醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第2單元 試驗(yàn)方法 細(xì)胞毒性試驗(yàn)：瓊脂擴(kuò)散法及濾膜擴(kuò)散法?

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)的目的和意義

目的：評級醫(yī)療器械和生物材料致細(xì)胞毒性反應(yīng)的潛在性，并預(yù)測*終生物體應(yīng)用時(shí)的組織細(xì)胞反應(yīng)。通過體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，可檢測供試品接觸細(xì)胞后細(xì)胞發(fā)生生長抑制、功能改變、細(xì)胞溶解、死亡或其他毒性反應(yīng)。

意義：可在短時(shí)間內(nèi)較經(jīng)濟(jì)、簡便地篩選出批量供試品的細(xì)胞毒性，它為動(dòng)物試驗(yàn)的進(jìn)行與否提供了先決條件，對新型醫(yī)療器械及生物材料的研制和應(yīng)用提供了重要保證。?

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法

體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)具有通用性，可以適用于各種醫(yī)療器械和生物材料的評價(jià)，GB/T16886.5標(biāo)準(zhǔn)不是規(guī)定一個(gè)單一的試驗(yàn)方法，而是規(guī)定一個(gè)試驗(yàn)方案，需要在一系列試驗(yàn)步驟中判斷，以選出*合適的試驗(yàn)，試驗(yàn)主要分三類：浸提液試驗(yàn)，直接接觸試驗(yàn)和間接接觸試驗(yàn)（瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和濾膜擴(kuò)散試驗(yàn)）。

由于醫(yī)療器械產(chǎn)品和材料的多樣性，植入機(jī)體環(huán)境中的變異性，與機(jī)體相互作用的復(fù)雜性等因素，選擇哪種方法進(jìn)行體外細(xì)胞毒性評價(jià)，不同的試驗(yàn)人員會(huì)有不同的選擇。當(dāng)一個(gè)評價(jià)項(xiàng)目具有多個(gè)試驗(yàn)方法時(shí)，應(yīng)考慮試驗(yàn)的原理、靈敏性、可選性、可定量性、重現(xiàn)性、試驗(yàn)材料的適用性及局限性等因素進(jìn)行選擇。例如浸提液法適合檢測溶出物的毒性；直接接觸法對材料的細(xì)胞毒性敏感性*高，可檢測出材料微弱的細(xì)胞毒性，間接接觸法中的瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)適合于毒性大的大批量材料篩選，濾膜擴(kuò)散法適合于小分子量毒性材料的評價(jià)。以上各種方法因原理不同，各有特點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)材料本身理化性質(zhì)、毒性作用強(qiáng)弱及其用途，正確地選擇試驗(yàn)方法。

浸提液試驗(yàn)-MTT法，XTT法和WST-8法比較

MTT（二苯基四氮唑）法，又稱MTT比色法，檢測原理是活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法有靈敏度高、較經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)。

XTT（二甲氧唑黃）是類似MTT的化合物，XTT法檢測原理與MTT法相同。在電子耦合試劑存在的情況下，活細(xì)胞線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶，可將黃色的XTT還原成水溶性的橘黃色的甲瓚，生成的甲瓚能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，不形成顆粒，可直接用酶標(biāo)儀測定吸光值。

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WST-8（四唑單鈉鹽）屬于MTT的升級產(chǎn)品，檢測原理是在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲瓚產(chǎn)物。產(chǎn)物顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，但是價(jià)格比MTT法略高。

醫(yī)療器械測試周期：

2周，具體視產(chǎn)品而定，可詢問我司醫(yī)療工程師；

體外細(xì)胞毒性檢測送樣要求：

ISO 10993標(biāo)準(zhǔn)：?固體或粉末狀： 2個(gè)完整樣品，每個(gè)樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學(xué)品：10ml及以上

ISO 7405標(biāo)準(zhǔn)： ??固體或粉末狀： 2個(gè)完整樣品，每個(gè)樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學(xué)品：10ml及以上

GB 16886/?14233標(biāo)準(zhǔn)：??固體或粉末狀： 2個(gè)完整樣品，每個(gè)樣品需120 cm2 或 4 g及以上； 液體或化學(xué)品：10ml及以上

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