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蚯蚓急性毒性試驗有效性

對照組的死亡率在試驗結(jié)束時不能超過10%，試驗是有效的。

5儀器設(shè)備

試驗室常規(guī)儀器設(shè)備和特殊設(shè)備：

——蚯蚓養(yǎng)殖（見附錄A）；

——濾紙：80g／～85g／，厚度左右，中級；

——人工土壤試驗基質(zhì)。

泥炭蘚灰10% （pH值盡可能接近～，無明顯植物殘體，磨細，風(fēng)干，測定含水量）；

高嶺黏土20%（高嶺石質(zhì)量分數(shù)大于30%）；

石英砂70%（50μm～200μm粒徑的細砂質(zhì)量分數(shù)在50%以上）；

加入碳酸鈣調(diào)pH值為±（見參考文獻（6））；

以正確比例混合人工土壤的各個干燥組分。為了混合均勻，可采用大型試驗室攪拌器或小型水泥電動攪拌機。然后取少量上述樣品置于105條件下烘干稱重，測定其含水量。加入去離子水使其含水量達到干重的35%左右，混合均勻。混合物不能過濕，當擠壓人造土壤時不能有水分出現(xiàn)。

——玻璃容器：結(jié)晶皿，或加有蓋玻璃或具孔塑料板的1L燒杯。

——培養(yǎng)裝置：光照度400lx～800lx，溫度控制±2的培養(yǎng)箱。

試驗生物

推薦的蚯蚓品種是赤子愛勝蚓Eisenia foefida（Michaelsen），雖然這種蚯蚓不是典型的土壤品種，但它存在于富含有機質(zhì)的土壤中，對化學(xué)物質(zhì)的敏感性與真正棲息在土壤中的蚯蚓類似，其生命周期短，在20的條件下，孵化需要3～4周，7～8周即可發(fā)育成熟。它繁殖能力強，一條蚯蚓可以在一周內(nèi)產(chǎn)2～5個蚓繭，每個蚓繭可孵出幾條蚯蚓。它易于在含各種有機廢物的土壤中飼養(yǎng)，蚓繭容易購得或從一個來源分發(fā)，這有利于確保采用同一品系（見附錄A）。

赤子愛勝蚓存在兩個分支，有些分類學(xué)家將其分開（見參考文獻（1）），其形態(tài)很相象，但的環(huán)節(jié)上有一典型的橫紋或環(huán)帶，而 andrei則沒有，但帶有斑駁的紅色。如果可能宜采用 foetida。當必須使用某種方法時，也可以使用其他品種。

選擇二月齡以上，體重300 mg～600 mg的健康蚯蚓供試驗用。

6試驗方法

濾紙試驗

采用長8cm，直徑3cm的平底玻璃管。內(nèi)壁襯鋪濾紙，濾紙的大小以不重疊為宜。

受試物溶于水（溶解度大于1000mg／L）或適宜的有機溶劑（如丙酮、正己烷、氯仿），在已知濃度范圍內(nèi)配成濃度系列溶液。用移液管向每個玻璃管移入1mL受試物溶液，用過濾的壓縮空氣吹干，氣體流速不要太快。在干燥過程中，水平旋轉(zhuǎn)玻璃管（對不易溶解于水或有機溶劑中的物質(zhì)必須重復(fù)幾次上述過程），以獲得試驗所需的受試物在濾紙上的沉積量。對照組用1mL的去離子水或有機溶劑處理。干燥后在每一玻璃管內(nèi)加1mL去離子水以濕潤濾紙，用留一小孔的塞子或塑料薄膜封住玻璃管口。