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農業植物纖維戊聚糖含量測定方法

作者:百檢網 時間:2022-08-11 來源:互聯網

戊聚糖是植物纖維原料檢測中的非淀粉多糖之一,在谷物加工過程,也是影響產品品質的重要功能性成分。在生理功能上,戊聚糖具有潤腸通便、降血糖、降血脂、增強免疫、減肥和降低結腸癌風險等作用,尤其是在對腸道菌群中相關水解酶的代謝起到抑制作用,所以戊聚糖可以發展成為慢發酵型潛在益生元,在保健功效上具有一定研究價值,此外戊聚糖還作為增稠劑和保濕劑,應用在冰淇淋、飲料、調味品、乳制品等食品行業。

檢測方法的選擇


1、色譜法:色譜法有液相色譜法、氣相色譜法和陰離子交換色譜法, 其基本原理是先將聚糖水解成單糖, 氣相色譜法還要將水解的單糖進行衍生化,制備成揮發性的單糖衍生物, 然后通過分離和檢測裝置測定各種單糖的濃度。 色譜法測量精度高, 特別是陰離子交換色譜法已廣泛用于測量植物原料和紙漿中的各種單糖含量, 但由于色譜儀價格昂貴,所以檢測成本較高,這也是為什么該研究院找到我們檢測的原因之一。

2、比色法: 比色法有二羥基甲苯-三氯化鐵分光光度法、苯胺醋酸溶液分光光度法和間苯三酚分光光度法等方法, 比色法的基本原理是將聚戊糖水解成單糖, 然后進一步脫水生成糠醛, 糠醛再與顯色劑作用形成有色物質, 通過分光光度計測定特定波長下的吸光強度, 再通過標準曲線計算出聚戊糖的含量。

經過比對,我們決定對植物源產品進行酶解后,以鹽酸羥胺,吡啶和醋酸酐為衍生試劑進行樣品衍生,以氣質聯用儀為檢測設備進行測定。在對酶解和水解方案的選擇和衍生方法確定,我們也對酸解和酶解方案進行了對比實驗,結果顯示,酶解方案的穩定性優于酸解,同時在樣本保存方面,酶解方案更優,因此選擇酶解方案作為樣本前處理法。實驗并也對衍生方法和衍生條件進行優化。經過對各個重點環節進行多次實驗,*終確定*優方案。

主要試驗步驟


1.試驗設計

試驗設計分成平行試驗和空白實驗。平行試驗的所有樣品平行做兩份試驗。空白實驗不加試樣,用于衍生化試驗。每批樣品(少于20個)或每20個樣品做一個空白試驗

2.酶解

準確量取液態樣品0.5mL,或稱取固態樣品50mg于25mL的蒸餾水(pH=6.0)中,攪拌至完全溶解。稱取6.0mg木聚糖酶,溶解于5mL蒸餾水中,待酶溶解后加入到戊聚糖樣品溶液,40℃水浴加熱振蕩反應50min。樣品冷凍干燥,待衍生。

3.衍生化

待衍生物加入10.0 mg鹽酸羥胺,0.5 mL吡啶,振蕩溶解,移入烘箱,90℃反應30 min,取出冷卻至室溫。加入0.5 mL醋酸酐,于90℃烘箱反應30 min。衍生化后溶液加入甲醇定容,溶液搖勻后過有機濾膜,濾液待上機測定。

4.測定及繪制曲線

采用逐級減少的方法稱取阿拉伯糖和木糖單糖,并進行衍生化實驗。衍生化后溶液用于氣相色譜—質譜聯用儀進行定量分析。根據所用氣相色譜—質譜聯用儀的性能及待測試樣的實際情況選擇*佳的測試條件測定衍生化后溶液,取樣品衍生溶液1μ L注入氣相色譜質譜聯用儀中,記錄總離子流質譜圖和選擇離子質譜圖,對定量選擇離子進行峰面積積分,外標法定量。以峰面積A為縱坐標,相應濃度c為橫坐標,繪制標準工作曲線,每次都應該使用已知的校準化合物對儀器進行*優化處理,使儀器的靈敏度、穩定性和分離效果處于*佳狀態。

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