HJ 1216-2021 水質(zhì) 浮游植物的測定 0.1 ml 計數(shù)框-顯微鏡計數(shù)法

1 適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中浮游植物的 0.1 ml 計數(shù)框-顯微鏡計數(shù)法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水中浮游植物的密度測定。

樣品濃縮 50 倍時，對角線方式計數(shù)方法檢出限為 9.2×103cells/L；行格方式計數(shù)方法檢出限為3.0×103 cells/L；全片方式計數(shù)方法檢出限為 9.2×102 cells/L；隨機視野方式計數(shù)的方法檢出限與觀察的視野數(shù)、顯微鏡視野面積有關(guān)，按附錄A 計算。

2 規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是未注日期的引用文件，其新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 14581 水質(zhì) 湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ/T 91 地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ 494 水質(zhì) 采樣技術(shù)指導(dǎo)

3 術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

浮游植物 phytoplankton

在水中營浮游生活的微小藻類植物，通常浮游植物就是浮游藻類，包括原核的藍藻和其它各類真核藻類。

3.2

顯微鏡計數(shù)視野 microscope counting field

顯微鏡視野中限定一定面積的區(qū)域，用于定量計數(shù)浮游植物。

3.3

檢出限 detection limit

單次計數(shù)過程中，發(fā)現(xiàn)的概率不低于 99%時低的浮游植物密度。

4 方法原理

在顯微鏡下，利用 0.1 ml 計數(shù)框?qū)悠分械母∮沃参镞M行人工分類和計數(shù)，計算單位體積樣品中各種類浮游植物的細胞數(shù)量。

5 試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實驗用水為新制備的去離子水或蒸餾水。

5.1 碘（I2）。

5.2 碘化鉀（KI）。

5.3 甲醛溶液：w＝37%～40%。

5.4 丙三醇（HOCH2CHOHCH2OH）。

5.5 魯哥氏碘液：

稱取 60 g 碘化鉀（5.2），溶于 100 ml 水中，再加入 40 g 碘（5.1），充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙猓铀ㄈ葜?1000 ml，轉(zhuǎn)移至棕色磨口玻璃瓶，室溫避光保存。

6 儀器和設(shè)備

6.1 25 號浮游生物網(wǎng)：網(wǎng)孔直徑為 0.064 mm，網(wǎng)呈圓錐形，網(wǎng)口套在銅環(huán)上，網(wǎng)底端有出水開關(guān)活塞。

6.2 定性采樣瓶：30 ml～100 ml 廣口聚乙烯瓶。

6.3 采水器：不銹鋼或有機玻璃材質(zhì)，圓柱形。容量和深度規(guī)格要滿足采樣要求。

6.4 定量采樣瓶：1 L～2 L 廣口聚乙烯瓶。

6.5 正置或倒置生物顯微鏡：物鏡 4×、10×、20×、40×，目鏡 10×或 15×。

6.6 濃縮裝置：1 L～2 L 筒形分液漏斗或量筒。

6.7 樣品瓶：50 ml 具塞棕色玻璃廣口瓶。

6.8 超聲波發(fā)生裝置：工作頻率 40 kHz，水浴方式。

6.9 微量移液器：100 μl。

6.10 0.1 ml 浮游植物計數(shù)框：面積 20 mm×20 mm，框內(nèi)劃分橫豎各 10 行格，共 100 個小方格。

6.11 蓋玻片：面積 22 mm×22 mm，厚度小于 0.2 mm。

6.12 載物臺測微計：又稱鏡臺測微計，1 mm/100 DIV，分劃值為 0.01 mm。

注：DIV 指等分格，1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。

6.13 目鏡分劃板：又稱目鏡測微尺，5 mm/50 DIV，分劃值為 0.1 mm。

6.14 計數(shù)器。

6.15 一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

7 樣品

7.1 樣品的采集

7.1.1 定性樣品

點位布設(shè)及采樣頻次按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。也可根據(jù)調(diào)查研究目的確定。

使用 25 號浮游生物網(wǎng)（6.1）采集定性樣品。關(guān)閉浮游生物網(wǎng)底端出水活塞開關(guān)，在水面表層至 0.5 m 深處以 20 cm/s～30 cm/s 的速度做“∞”形往復(fù)，緩慢拖動約 1 min～3 min，待網(wǎng)中明顯有浮游植物進入，將浮游生物網(wǎng)（6.1）提出水面，網(wǎng)內(nèi)水自然通過網(wǎng)孔濾出，待底部還剩少許水樣（5 ml～10 ml）時，將底端出口移入定性采樣瓶（6.2）中，打開底端活塞開關(guān)收集定性樣品。采集分層樣品時，用 25 號浮游生物網(wǎng)（6.1）過濾特定水層樣品，其他步驟同采集表層樣品。定性樣品采集完成后及時將浮游生物網(wǎng)清洗干凈。樣品采集后冷藏避光運輸。

如有定性樣品采集的技術(shù)規(guī)范，按技術(shù)規(guī)范有關(guān)要求執(zhí)行。

7.1.2 定量樣品

按照GB/T 14581、HJ/T 91 和HJ 494 的相關(guān)規(guī)定進行定量樣品的采集。

用采水器（6.3）采集樣品至定量采樣瓶（6.4）中，一般采集不少于 500 ml 樣品。若水體透明度較高，浮游植物數(shù)量較少時，應(yīng)酌情增加采樣體積。定量樣品采集后，樣品瓶不應(yīng)裝滿，以便搖勻。

注 1：有些浮游植物（如藍藻）常浮于水面或成片、條帶分布，可在此水華密集區(qū)域采樣作為峰值參考。注 2：定量樣品采集應(yīng)在定性樣品采集之前。應(yīng)保持固定時間段采樣，以便結(jié)果之間可相互比較。

7.2 樣品的保存

7.2.1 定性樣品

定性樣品采集后立即加入魯哥氏碘液（5.5），用量為水樣體積的 1.0%～1.5%。鏡檢活體樣品不加魯哥氏碘液固定。定性樣品在室溫避光條件下可保存 3 周；1 ℃～5 ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月。活體樣品在 4 ℃～10 ℃避光條件下可保存 36 h。

7.2.2 定量樣品

定量樣品采集后立即加入魯哥氏碘液（5.5）固定，用量為水樣體積的 1.0%～1.5%。也可將魯哥氏碘液（5.5）提前加入定量采樣瓶（6.4）中帶至現(xiàn)場使用。定量樣品在室溫避光條件下可保存 3 周；1 ℃～ 5 ℃冷藏避光條件下可保存 12 個月。

樣品在保存過程中，應(yīng)每周檢查魯哥氏碘液（5.5）的氧化程度，若樣品顏色變淺，應(yīng)向樣品中補加適量的魯哥氏碘液（5.5），直到樣品的顏色恢復(fù)為黃褐色。

注：若樣品需長期保存，應(yīng)加入甲醛溶液（5.3），用量為水樣體積的 4%。

8 分析步驟

8.1 混勻樣品

每次取樣前，采用上下顛倒至少 30 次的方式充分混勻所采樣品，混勻動作要輕。

8.2 定性樣品的分析

在顯微鏡（6.5）下觀察定性樣品（7.1.1），鑒定浮游植物的種類。優(yōu)勢種類鑒定到種，其他種類至少鑒定到屬。部分物種鑒定參考資料見參考文獻。

注：種類鑒定除用定性樣品觀察外，還可吸取已完成計數(shù)的定量樣品進行觀察。

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