肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，也稱為蛋白質(zhì)指紋，是一種開發(fā)于1933年的蛋白質(zhì)高通量分析方法，用于鑒定蛋白質(zhì)。內(nèi)切蛋白酶**將未知的靶蛋白裂解為較小的肽段，這些肽的**質(zhì)量可以使用質(zhì)譜儀進(jìn)行準(zhǔn)確測量，并且還可以獲得未知蛋白質(zhì)的肽峰列表。使用生物信息學(xué)方法將峰列表與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的理論肽峰列表進(jìn)行比較。理論數(shù)據(jù)庫將所有有機體的所有已知基因組翻譯成蛋白質(zhì)，理論上將蛋白質(zhì)水解成小肽，并將每種蛋白質(zhì)計算出肽的**質(zhì)量。同時，還將裂解的未知蛋白質(zhì)的肽質(zhì)量與基因組中編碼的每種蛋白質(zhì)的理論肽質(zhì)量進(jìn)行比較，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析可以找到*佳匹配。

　　肽質(zhì)量指紋圖譜分析過程

　　生物組織或細(xì)胞中的蛋白質(zhì)純化后，用2D或SDS-PAGE凝膠分離并使用成像技術(shù)進(jìn)行比較。選擇差異顯著的蛋白進(jìn)行進(jìn)一步分析。對選定的蛋白質(zhì)進(jìn)行脫膠和酶解，得到一系列能反映蛋白質(zhì)特性的肽段。通過質(zhì)譜精確測量肽混合物的指紋圖譜，從而獲得蛋白質(zhì)的分子量。在已知數(shù)據(jù)庫中搜索所選蛋白質(zhì)提供了準(zhǔn)確定性。

　　肽質(zhì)譜指紋圖譜的應(yīng)用

　　隨著分析化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PMF因其靈敏度高、穩(wěn)定性好、樣品損失小而被廣泛應(yīng)用于藥品真實性鑒定、食品質(zhì)量控制、人類疾病診斷等各個領(lǐng)域。世界衛(wèi)生組織和中國國家食品藥品監(jiān)督管理局將PMF作為一種物質(zhì)鑒別和過程控制技術(shù)，為質(zhì)量評價提供客觀指標(biāo)。

　　肽質(zhì)譜指紋圖譜的優(yōu)點

　　1.不需要依靠蛋白質(zhì)測序來進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定，而是依靠肽的質(zhì)量。

　　2.過程簡單快速，是一種使用一級質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定的經(jīng)典方法

　　肽質(zhì)譜指紋圖譜的限制

　　1.目的蛋白質(zhì)序列必須存在于目標(biāo)數(shù)據(jù)庫中;

　　2.適用于單一蛋白質(zhì)分析。混合蛋白質(zhì)的存在會大大增加分析的復(fù)雜性;

　　3.質(zhì)量相似的肽會大大增加匹配的難度。

　　MALDI-TOF肽質(zhì)量指紋圖譜

　　快速準(zhǔn)確地鑒定蛋白質(zhì)在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中至關(guān)重要。PMF可以通過基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時間(TOF)質(zhì)量分析儀進(jìn)行測量。它是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中*常用的方法之一。

　　MALDI使用激光照射由樣品和基板形成的共晶薄膜。基質(zhì)從激光吸收能量并將其轉(zhuǎn)移到生物分子上。在電離過程中，質(zhì)子被轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子中獲得，生物分子發(fā)生電離。因此，MALDI是一種軟電離技術(shù)，適用于混合物和生物大分子的測定。TOF的原理是，在電場的作用下，離子加速通過飛行管飛行，并且根據(jù)飛行到檢測器的時間來檢測離子。MALDI-TOF-MS具有高靈敏度、高精度和高分辨率的特點。它在生命科學(xué)和許多其他領(lǐng)域中的樣本分析起重要作用。