1.1主要儀器與試劑

　　1.2實驗方法與測試條件

　　以二甲基亞砜(DMSO)為溶劑空白：二甲基亞砜，掃描范圍：200～700nm，記錄樣品紫外–可見吸收光譜;采用KBr壓片法，測定范圍：4000～400cm–1，分辨率：4cm–1，記錄樣品紅外光譜;以CDCl3為溶劑，測試溫度為25℃，使用5mmNMR探頭，以四甲基硅烷(TMS)為內標測定樣品NMR譜;采用電轟擊模式(EI)離子源，離子源溫度200℃，掃描范圍為20～600u，電子轟擊能量為70eV。

　　2結果與討論

　　2.1紫外–可見吸收光譜

　　金雀花堿甲醇溶液的紫外光譜中，于λmax=306nm處有*大吸收，是由芳雜環的雙鍵共軛的烯烴產生的*大吸收峰;λ=233nm的吸收峰由—O=C基團的n–π*的電子躍遷產生。說明本品的紫外吸收符合金雀花堿的紫外吸收特征。

　　2.2紅外吸收光譜

　　采用溴化鉀壓片法測其紅外光譜，測定數據見表1。

　　金雀花堿紅外光譜圖中3083cm–1處的弱吸收峰為雙鍵的=CH伸縮振動，1563，1540cm–1為C=C雙鍵的伸縮振動，746，735，820，791cm–1為順式、三取代雙鍵的特征，這些都與預定結構的環狀雙烯結構應有的吸收一致，1649cm–1處的強吸收為羰基伸縮振動，由于與雙鍵的共軛作用，吸收頻率較低，證明存在該結構：

　　。3442，3315，3281cm–1為仲胺的—NH伸縮振動特征，與預定結構的—NH應有的吸收一致，1479，1441，1452，1358，1346，1310cm–1為—CH

　　的彎曲振動，證明存在結構：

　　。

　　上述結果表明：金雀花堿樣品化學結構中存在羰基、雙鍵、叔氨基特征，樣品的紅外光譜吸收與預訂的化學結構紅外吸收一致。

　　2.3核磁共振波譜

　　使用氘代氯仿(CDCl3)溶解試樣，四甲基硅烷TMS作內標(δ0)，按1.2測定金雀花堿的1HNMR，13CNMR，DEPT135，DEPT90，1H–1HCOSY，1H–1H

　　NOESY，1H–13CHSQC及1H–13CHMBC譜，1HNMR，13CNMR譜圖分別見圖1、圖2，測定數據見表2。

　　對金雀花堿樣品的一維、二維NMR圖譜進行分析，認為金雀花堿符合預定化學結構(見圖3)。

　　樣品的1HNMR譜圖中，δH7.30峰是溶劑峰(未氘代完全的氯仿)，δH2.17峰是殘留的微量丙酮溶劑峰，δH0.00峰為內標四甲基硅烷(TMS)峰，其余信號為金雀花堿樣品的譜峰。氫譜中設定δH6.45的dd峰積分值為1，則圖譜總積分值為14，與預定分子結構中的氫原子數目完全一致。δH5.50～δH7.50之間有三簇峰，分別為δH6.85(dd，J=6.9，1.1Hz)，δH6.45(dd，J=9.1，1.4Hz)，δH7.29(dd，J=9.1，6.9Hz)，從化學位移、耦合常數分析，應為芳雜環氫，且3個氫緊鄰，可分別歸屬為H–8，H–7，H–9。δH1.45的寬矮峰含一個氫，歸屬為NH信號H–1。其余δH1.80～δH4.50之間有幾簇峰為環上的亞甲基，次甲基信號，H–4為手性亞甲基，兩個氫不等價，且受羰基與氮原子的影響，出現在較低場δH4.12(d，J=15.6Hz)與δH3.90(dd，J=15.6Hz，0.9Hz)，H–13則出現在較高場δH1.96，其余信號準確歸屬需要二維譜。

　　樣品的13CNMR圖譜中，δC77.1處的三重峰為溶劑峰(氘代氯仿)，δC0.00為內標四甲基硅烷(TMS)，剩余有11條譜線，與預定分子碳數目11一致。利用DEPT譜可判定11個碳中有2個季碳，6個仲碳，2個叔碳，與預定結構一致。δC163.6的季碳為羰基C–6，δC163.6的季碳則為芳雜環季碳C–10，δC138.7，δC116.5，δC104.9的叔碳為芳雜環次甲基碳C–8，C–7，C–9。其余幾條碳為環烷上的亞甲基、次甲基信號。1H–1HTOCSY譜可以提供各自旋體系的耦合信息，從1H–1HTOCSY譜中可以看出，有兩條自旋體系鏈，一組為芳雜環體系，另一組為環烷體系。1H–1HCOSY可以提供1H–1H之間通過成鍵作用的相關信息，將自旋體系內直接相鄰的1H信號關聯起來。從圖中可以看出，δH6.85(H–8)峰與δH6.45(H–7)、δH7.29(H–9)峰有耦合，形成芳雜環上相鄰三個氫一個自旋片斷。δH4.12(H–4a)、δH3.9(H–4b)峰只與δH2.32(m)峰有相關性，證實δH2.32(m)峰對應于H–3。δH2.32(m，H–3)峰還與δH1.96(H–13)、δH3.09峰相關，故δH3.09峰對應于H–2。1H–13CHSQC譜可以將直接相連的氫與碳信號峰對應于1HNMR和13CNMR信號，為確證其結構提供了進一步的證據。而δC163.6等季碳則無氫信號相對應，進一步證實了季碳結構。不對稱的CH2則由一個碳信號對應于2個氫信號，如δC49.7為C–4，其對應于2個氫信號δH4.12(H–4a)與δH3.90(H–4b)。其余直接相關信號都將一一對應。由于氫信號的歸屬，使得相應的碳信號明確。采用1H–13CHMBC可確定季碳信號歸屬，并對整個體系信號作進一步驗證。從1H–13CHMBC譜圖中可以看出，δC163.6峰與H–8、H–7、H–4有相關性，證實該碳信號在結構中位置為C–6。δC163.6峰則與H–8、H–9、H–4相關，同時還與H–12相關，證實該碳信號為C–10。C–2與C–12化學位移較為接近，從結構可知，C–2與H–4為三鍵，可觀測到遠程相關信號，C–12與H–4有5鍵，信號弱或沒有。通過HMBC圖中可以看到，只有δC53.0峰與H–4有相關信號，證實δC53.0峰對應于C–2。從圖中還可以看到C–11與H–9、H–13、H–12的相關信號。其余相關點也能觀測到，與圖3結構一致。NOESY譜可以進一步確認化合物的空間結構，同時也為相鄰片斷的位置判定提供依據。從NOESY譜中可以看出，δH3.08(H–2)峰與δH1.45(NH)峰存在空間耦合。δH7.29(H–9)峰與δH2.90(H–11)峰存在空間耦合。這些信息也與其預定結構完全一致。以上推斷證實樣品金雀花堿結構與圖3結構一致。將其NMR數據結果及解析一并列入表2中。

　　注：δC表示碳的化學位移，δH表示氫的化學位移;*C表示季碳，s，

　　d，dd，m，分別表示單峰，雙峰，兩個雙峰，多重峰;J為耦合常數。1H，2H，3H分別表示1，2，3個氫原子;表中編號與圖3中編號一致。

　　2.4電子轟擊質譜圖

　　取適量金雀花堿樣品放入進樣桿，進行質譜分析，其質譜圖見圖4。用所得試樣的質譜圖進行譜庫搜索，從NIST08譜庫中檢索得到相似度為96%的金雀花堿譜圖，分子式為C11H14N2O，相對分子質量為190.24。CAS編號為485–35–8，外文名為Cytisine。

　　質譜圖中*高質荷比m/z190為樣品的分子離子峰，說明其分子量為190，與預定結構分子量一致;從*高質荷比與高端質荷比之差分析m/z190–175=15;化合物質譜裂解丟失合理，化合物的分子量為190u。分子離子m/z190豐度比較大表明化合物中含有多重共軛基團，且具有環狀結構，使分子穩定性較高。另外譜圖中m/z146、m/z44為化合物裂解生成的碎片峰。m/z44是化合物羰基的α裂解或N的i裂解產生的碎片峰，其結構式為：

　　化合物中主要碎片峰m/z190，m/z160，m/z146，m/z44，m/z134等符合化合物應有的裂解機理。離子的具體裂解模式見圖6。

　　4結論

　　研究運用UV，IR，1D和2DNMR與MS4種波譜技術對金雀花堿的結構進行了詳細解析，確定了

　　IR信號峰歸屬、NMR中主要碳(氫)信號的歸屬以及相互耦合關系、MS主要碎片離子的裂解途徑，這對金雀花堿及其同類藥物的結構鑒定和質量控制有重要價值。