陜南地處秦巴山區(qū)之間，水資源豐富，地理?xiàng)l件復(fù)雜，具有生產(chǎn)和發(fā)展中藥材得天獨(dú)厚的條件和豐富的資源，素有“生物基因庫”和“天然藥庫”之稱，是全國中藥材的傳統(tǒng)產(chǎn)地和集散地之一。中藥材在生長和儲(chǔ)存過程中容易受到病蟲害的影響，大多使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治，因此在中藥材中會(huì)存在農(nóng)藥殘留問題[1–3]。中藥材的質(zhì)量評價(jià)不僅包括有效成分，還包括一些外源性的污染物[4]，如農(nóng)藥、重金屬、微生物等，其中農(nóng)藥殘留問題引起世界各國的高度重視。

　　目前有關(guān)中藥材中農(nóng)藥殘留分析的方法主要有氣相色譜法(GC)[4]、氣相色譜–質(zhì)譜法(GC–MS)[5]、高效液相色譜法(HPLC)[6]、高效液相色譜法–質(zhì)譜法(HPLC–MS)[7–8]等。氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀由于具有較高的靈敏度和較強(qiáng)的定性能力，成為目前農(nóng)藥多殘留同時(shí)檢測的主流分析儀器，可以實(shí)現(xiàn)數(shù)百種農(nóng)藥同時(shí)檢測[9–10]。中藥材基質(zhì)復(fù)雜，在進(jìn)行農(nóng)藥殘留分析通常需要對樣品提取液進(jìn)行凈化。農(nóng)藥殘留的凈化技術(shù)主要有液–液萃取;固相萃取和凝膠滲透色譜(GPC)等方法。凝膠滲透色譜(GPC)作為一種新型的樣品凈化技術(shù)，已經(jīng)成功地應(yīng)用于各類樣品中農(nóng)藥的多殘留分析，但應(yīng)用于中藥材中農(nóng)藥多殘留的分析較少。筆者采用GPC或GPC–SPE凈化樣品，氣相色譜–質(zhì)譜法

　　(GC–MS)作為檢測儀器，建立了GC–MS同時(shí)測定陜南中藥材中81種農(nóng)藥殘留的檢測方法。

　　1實(shí)驗(yàn)部分

　　1.1主要儀器與試劑

　　氣相色譜–質(zhì)譜儀：7890A/5975C型，美國Agilent公司;凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)：GPCultra10836型，德國LCTech公司;超純水制備儀：Mill-Q型，美國Millipore公司;乙二胺-N-丙基甲硅烷(PSA)固相萃取小柱：300mg/3mL，使用前用5mL乙腈活化并保持柱體濕潤，美國Agilent公司;乙腈、環(huán)己烷、乙酸乙酯、丙酮和正己烷：色譜純，美國TEDIA公司;氯化鈉和無水硫酸鈉：分析純，美國Sigma公司;81種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：包括有機(jī)磷類、有機(jī)氯類、氨基甲酸酯類農(nóng)藥，純度不小于97℅，美國Sigma公司;中藥材均購自陜南地區(qū)。

　　1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

　　準(zhǔn)確稱取適量各種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用含0.1%乙酸的乙腈溶解，配制成濃度為1000μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液，貯存于4℃冰箱中備用。分別準(zhǔn)確移取上述81種農(nóng)藥化合物單標(biāo)儲(chǔ)備液500μL于50mL容量瓶中，用含0.1%乙酸的乙腈定容，配制成濃度均為10μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。用含0.1%乙酸的乙腈逐級稀釋得到1.0，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，貯存于4℃冰箱中備用。

　　1.3樣品前處理

　　1.3.1樣品提取

　　取中藥材樣品自然陰干，用高速粉碎機(jī)粉碎，過250μm(60目)篩，稱取6g(精確至0.01g)樣品至50mL聚丙烯離心管中，加入6gNaCl，25mL超

　　純水混勻，超聲浸泡30min。加入15mL含0.1%乙酸的乙腈，振蕩20min，以4500r/min離心6min，取10mL上清液至50mL雞心瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮?dú)獯蹈桑靡宜嵋阴エC環(huán)己烷(體積比為1∶1)10mL溶解殘?jiān)^濾紙至GPC進(jìn)樣瓶中，待凈化。

　　1.3.2樣品凈化

　　對于天麻樣品采用凈化法1——凝膠滲透色譜(GPC)凈化;杜仲、金銀花、山茱萸等樣品采用凈化法2——GPC–SPE固相萃取進(jìn)行凈化。

　　(1)凈化法1(天麻)GPC凈化條件。凝膠柱：內(nèi)徑25mm，柱長400mm，填料為Bio-Beads-S–X3Beads(38～74μm)或相當(dāng)者;流動(dòng)相：乙酸乙酯–環(huán)己烷(體積比為1∶1);流速：5.0mL/min;進(jìn)樣量：5mL;收集時(shí)間：900～1900s;在線濃縮至2mL，氮?dú)獯抵两桑?mL乙腈溶解定容，待檢測。

　　(2)凈化法2(杜仲、金銀花、山茱萸)。提取液經(jīng)GPC凈化，GPC凈化參數(shù)同1.3.2(1)，將900～1900s經(jīng)GPC凈化后的流出液氮?dú)獯蹈桑缓筮M(jìn)行SPE凈化過程，5mL乙腈洗滌濃縮瓶，洗滌液合并上樣，10mL乙腈洗脫，收集全部流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮?dú)獯蹈桑?.0mL乙腈溶解定容，待檢測。

　　1.4氣相色譜–質(zhì)譜分析條件

　　1.4.1氣相色譜條件

　　色譜柱：HP–5MS(30m×0.25mm，0.25μm，美國Agilent公司);載氣：氦氣(純度不小于99.999%)，流量1.0mL/min;進(jìn)樣量1.0μL，不分流進(jìn)樣(1min后開啟);進(jìn)樣口溫度：250℃;程序升溫：初始溫度60℃，保持2min，以15℃/min升到150℃，再以3℃/min升到180℃，保持2min，以5℃/min升到280℃，保持3min;質(zhì)譜連接口溫度：280℃。

　　1.4.2質(zhì)譜條件

　　電子轟擊離子源：EI;電離能：70eV;離子源溫度：230℃;四*桿溫度：150℃;掃描模式：選擇離子監(jiān)測(SIM)。81種農(nóng)藥測定參數(shù)見表1。

　　2結(jié)果與討論

　　2.1提取條件

　　2.1.1提取方式

　　中藥材中農(nóng)藥殘留的提取方法主要有超聲波提取法和加速溶劑萃取法，由于加速溶劑萃取法需要專門的儀器設(shè)備，而超聲波提取法對實(shí)驗(yàn)條件要求較低，便于應(yīng)用，故本實(shí)驗(yàn)采用超聲波提取法對中藥材中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行提取。

　　2.1.2提取溶劑

　　分別考察乙腈、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷作為提取溶劑對中藥材中農(nóng)藥殘留的提取效果。稱取4份6.00g中藥材平行樣品，加入25mL超純水，超聲浸泡30min后分別加入15mL乙腈、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷，振蕩提取20min，由于乙腈與水互溶，加入過飽和的氯化鈉溶液，利用鹽析作用使水相和有機(jī)相分離，以除去水和水溶性雜質(zhì)，同時(shí)還可減少提取液中的雜質(zhì)含量并提高待測組分在有機(jī)相中的分配比。結(jié)果表明，乙酸乙酯和丙酮對絕大多數(shù)農(nóng)藥有較大的溶解度，易將農(nóng)藥提取出來，但同時(shí)大量雜質(zhì)也被提取出來，給凈化帶來困難;二氯甲烷對部分農(nóng)藥的提取回收率只有20%左右;乙腈回收率高，提取液雜質(zhì)含量少，故采用乙腈作為提取溶劑。由于部分農(nóng)藥在弱酸性條件下性質(zhì)穩(wěn)定，因此

　　采用含0.1%乙酸的乙腈進(jìn)行提取。*終確定的提取方法：6.00g樣品加25mL超純水，超聲浸泡30min后加入15mL含0.1%乙酸的乙腈，振蕩提取20min。

　　2.2凈化條件

　　參考凝膠滲透色譜在甘草及其提取物中農(nóng)藥殘留凈化方法中的應(yīng)用，對天麻、杜仲、金銀花、山茱萸進(jìn)行GPC凈化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：天麻回收率為78.5%～120.8%，而杜仲、金銀花、山茱萸可能存在基質(zhì)抑制效應(yīng)而回收率偏低。GPC主要去除糖、色素、油脂等大分子，杜仲、金銀花、山茱萸經(jīng)過GPC凈化后還存在一些小分子雜質(zhì)(有機(jī)酸和甾醇等)，產(chǎn)生基質(zhì)抑制效應(yīng)，需要進(jìn)行進(jìn)一步凈化，參考相關(guān)文獻(xiàn)，選取PSA固相萃取小柱進(jìn)行進(jìn)一步的凈化，經(jīng)過GPC凈化的收集液，使用氮?dú)獯蹈桑?mL乙腈溶解上樣，5mL乙腈洗滌濃縮瓶，洗滌液合并上樣，5mL乙腈洗脫，整個(gè)凈化過程保持流速2～3mL/min，收集所有流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用氮?dú)獯蹈桑?.0mL乙腈定容。

　　2.3線性方程、回收率、精密度和檢出限

　　以峰面積Y對農(nóng)藥質(zhì)量濃度X進(jìn)行線性回歸，得到線性方程，以3倍信噪比計(jì)算檢出限，結(jié)果見表2。

　　選取陜南出產(chǎn)具有代表性的中藥材：天麻、杜仲、金銀花、山茱萸，在1，5，10μg/kg3個(gè)添加水平下進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)添加水平做6次平行測定，其中杜仲在添加1μg/kg時(shí)，回收率為60.8%～128.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.9%～21.7%;添加5μg/kg時(shí)，回收率為66.0%～127.3%，RSD為7.6%～18.9%;添加10μg/kg時(shí)，回收率為69.0%～127.3%，RSD為7.7%～14.9%。天麻的回收率為78.5%～120.8%，RSD為7.6%～13.1%。山茱萸的回收率為71.7%～116.3%，RSD為10.3%～11.6%。金銀花的回收率為72.9%～116.0%，RSD為8.7%～18.9%。

　　3結(jié)語

　　建立了天麻、杜仲、金銀花和山茱萸中81種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測的氣相色譜-質(zhì)譜法。中藥材中的農(nóng)藥殘留提取液經(jīng)GPC或GPC–SPE固相萃取小柱凈化后用GC–MS法測定，天麻、杜仲、金銀花和山茱萸的加標(biāo)回收率較高。該方法操作簡單、凈化效果好、靈敏度高，準(zhǔn)確度和精密度均符合多殘留分析的要求。