作者:宋檢 時間:2022-10-21 來源:互聯(lián)網(wǎng)
熒光檢測器在黃曲霉毒素檢測中的應(yīng)用較早,技術(shù)較為成熟。黃曲霉毒素共有的香豆素結(jié)構(gòu)使熒光檢測法成為首要檢測方法,黃曲霉毒素在波長360nm的激發(fā)光下能發(fā)射出波長420nm的熒光。由于B1和G1分子的二呋喃結(jié)構(gòu)中碳碳雙鍵的吸電子誘導(dǎo)效應(yīng),致使分子熒光強(qiáng)度減弱,影響了方法的靈敏度和檢出限。
通過對雙鍵衍生變成飽和碳碳單鍵可增強(qiáng)B1和G1的熒光強(qiáng)度,通常采用的衍生法有柱前三氟乙酸衍生、柱后碘衍生、柱后溴衍生和柱后光化學(xué)衍生,這四種衍生方法目前均被AOAC官方方法采用。
柱前三氟乙酸衍生時需要在前處理部分增加衍生步驟,增加了前處理的時間以及結(jié)果的不確定度,同時B1、G1的衍生產(chǎn)物B2a、G2a存在穩(wěn)定性的問題。碘衍生法是飽和碘溶液和B1、G1在60~75 ℃下發(fā)生衍生反應(yīng),由于衍生池增加了柱后死體積,易造成色譜峰變寬,且每次都要配制新鮮的溶液。溴比碘的氧化性更強(qiáng),反應(yīng)效率更高,但由于溴本身不穩(wěn)定,不宜直接作為衍生試劑使用,衍生時采用以下兩種方式,一種是在柱后衍生泵中加入三溴化吡啶鎓(PBPB),室溫下與B1、G1發(fā)生反應(yīng);另一種是在流動相中加入溴化鉀和硝酸,利用Kobra cell儀電化學(xué)在線產(chǎn)生的溴進(jìn)行柱后衍生。
光化學(xué)衍生(PHRED)是將反應(yīng)線圈繞在紫外燈外,當(dāng)流動相進(jìn)過反應(yīng)線圈時,B1、G1被衍生成熒光較強(qiáng)的B2a、G2a,類似于B1、G1和三氟乙酸的反應(yīng)。Walking[37]將光化學(xué)衍生和Kobra cell電化學(xué)衍生法、碘衍生法進(jìn)行了比較,在花生中光化學(xué)衍生具有和后兩者相當(dāng)?shù)男Ч谟衩字衅钶^大。除化學(xué)衍生外,環(huán)糊精也可以增強(qiáng)黃曲霉毒素B1、G1和M1的熒光強(qiáng)度,不過環(huán)糊精和黃曲霉毒素間的作用機(jī)制尚無定論。
熒光檢測法需要在提取階段進(jìn)行比較才徹底的凈化,任何殘留的熒光性雜質(zhì)都可能造成對陽性的誤判,報出假陽性的結(jié)果。熒光檢測法必須確保目標(biāo)物的完全分離,當(dāng)其他真菌毒素和黃曲霉毒素同時檢測時,就對分離提出了更高的要求。
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