作者:宋檢 時間:2022-12-12 來源:互聯(lián)網(wǎng)
中國科學(xué)院上海有機化學(xué)研究所生命有機化學(xué)國家重點實驗室的周佳海課題組和UCLA的唐奕課題組合作,解析了高分辨率的LepI及其與底物類似物或產(chǎn)物4、5、6的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu),并通過與UCLA的Kendall Houk課題組合作開展理論計算工作,系統(tǒng)地闡釋了LepI催化的分子機制。該工作于2019年7月22日在線發(fā)表在Nature Chemistry上。周佳海課題組的博士生蔡毓娟、唐奕課題組的博士后Yang Hai和Masao Ohashi并列論文**作者。
周環(huán)反應(yīng)在合成領(lǐng)域中非常重要,它能夠同時構(gòu)建多個碳-碳/碳-雜原子鍵,并且往往具有很高的區(qū)域選擇性和立體選擇性。而新型周環(huán)酶的發(fā)現(xiàn)及其催化機制的解析,對未來周環(huán)反應(yīng)的開發(fā)具有重大的推動意義。但在自然界中,催化周環(huán)反應(yīng)的酶卻鮮少報道。
2017年, UCLA的唐奕教授課題組報道了一種S-腺苷甲硫氨酸(SAM)依賴的多功能周環(huán)酶LepI,它既能催化雜Diels-Alder(HDA)反應(yīng),又能催化逆Claisen重排反應(yīng)(Nature, 2017, DOI: 10.1038/nature23882)。LepI屬于O-甲基轉(zhuǎn)移酶家族,但是它卻沒有甲基轉(zhuǎn)移酶活性。為什么該酶可以立體選擇性地催化脫水反應(yīng)、HDA反應(yīng)和逆Claisen重排反應(yīng)?SAM的作用又是什么?為了回答這些問題,中國科學(xué)院上海有機化學(xué)研究所生命有機化學(xué)國家重點實驗室的周佳海課題組和UCLA的唐奕課題組、Kendall Houk課題組合作,進行了深入研究。
LepI蛋白的母體結(jié)構(gòu)通過硒的單波長散射方法被解析。在該結(jié)構(gòu)中,兩分子的LepI以N端結(jié)構(gòu)域互相纏繞交錯在一起,而C端結(jié)構(gòu)域則是具有O-甲基轉(zhuǎn)移酶家族典型的Rossman折疊這種超二級結(jié)構(gòu),且每分子的LepI結(jié)合一分子輔酶SAM。結(jié)合LepI與4、5、6復(fù)合物結(jié)構(gòu)以及對過渡態(tài)復(fù)合物結(jié)構(gòu)的計算和生化實驗,該文提出LepI在催化脫水反應(yīng)過程中,H133作為堿對吡啶酮上的羥基攫氫,R295以及附近的氫鍵網(wǎng)絡(luò)促進了這一反應(yīng)。而在HDA反應(yīng)和逆Claisen重排反應(yīng)中,SAM、H133和R295以及活性口袋中的其他*性殘基協(xié)同作用,產(chǎn)生一個合適的電場,使反應(yīng)物處于適宜反應(yīng)發(fā)生的取向,穩(wěn)定過渡態(tài),降低能壘,實現(xiàn)靜電催化,促進反應(yīng)的發(fā)生。
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