1 范圍

本標準規定了進出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢測方法。

本標準中MPN法適用于進出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢驗；平板計數法適用于進出口食品中大腸菌群的檢驗；β葡萄糖苷酶熒光法適用于進出口食品(不包括貝類)中大腸桿菌的檢驗；濾膜/MUG法適用于進出口方便面、膨化食品、礦泉水、飲料、牛奶(需用蛋白酶處理)、單晶糖和椒粒中大腸菌群和大腸桿菌的檢驗。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其*新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

SN/T 1538.1 培養基制備指南 第1部分：實驗室培養基制備質量保證通則

SN/T 1538.2 培養基制備指南第2部分：培養基性能測試實用指南

3 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1 大腸菌群 coliform

需氧及兼性厭氧，能在37℃48h分解乳糖產酸產氣的一群革蘭氏陰性無芽孢桿菌。

3.2 糞大腸菌群 fecal coliform

需氧及兼性厭氧，能在44.5℃±0.5℃，24h發酵乳糖產酸產氣的一群革蘭氏陰性無芽孢桿菌，該菌又可稱耐熱大腸菌群( thermotolerant coliform organisms)。

3.3 大腸桿菌 Escherichia coli

需氧及兼性厭氧，能在44.5℃±0.5℃48h分解乳糖產酸產氣，生化特征“ IMViC”為“++—或+——”的一群革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌又可稱大腸埃希氏菌。

4 檢驗方法

4.1 原理

4.1.1 *可能近似值(most probable number，MPN)法

MPN法是統計學和微生物學結合的一種定量檢測法。待測樣品經系列稀釋并培養后，根據其未生長的*低稀釋度與生長的*髙稀釋度，應用統計學概率論推算岀大腸菌群、糞大腸菌群或大腸杄菌在

待測樣品中的*大可能數。

4.1.2 平板計數法

大腸菌群在固體培養基中發酵乳糖產酸，在指示劑的作用下形成可計數的紅色或紫色，帶有或不帶有沉淀環的菌落。

4.1.3 β-葡萄糖苷酶熒光法

大腸桿菌中的β-葡萄糖苷酶可降解培養基中4-甲基傘形酮β-D葡萄糖苷酸(MUG)，并釋放4-甲基傘形酮熒光物質(4-MU)，該物質在紫外燈(波長366nm)下會顯現藍色熒光特點。

4.1.4 濾膜/MUG法

待測樣品通過濾膜過濾時，樣品中的大腸菌群和大腸桿菌被截留于濾膜表面。將濾膜貼附于LMG或BMA瓊脂上培養后，大腸菌群在ⅠMG瓊脂上會形成藍色菌落;而BMA瓊脂上的大腸杄菌由于葡萄糖苷降解4-甲基傘形酮β-D葡萄糖苷酸(MUG)并釋放4-甲基傘形酮，形成紫外光(366nm)下為藍白色熒光的菌落。

4.2 培養基與試劑

4.2.1 生理鹽水：見附錄A.1

4.2.2 Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液：見附錄A.2。

4.2.3 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)：見附錄A.3

4.2.4 煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)：見附錄A.4。

4.2.5 大腸桿菌肉湯(EC)：見附錄第A.5。

4.2.6 伊紅美藍瓊脂(EMB)：見附錄A.6

4.2.7 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)：見附錄A.7

4.2.8 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨MUG肉湯(LST-MUG)：見附錄A.8

4.2.9 Columbia-MUG：見附錄A.9。

4.2.10 蛋白胨-吐溫80稀釋液(PT)：見附錄A.10

4.2.11 乳糖莫能菌素葡萄糖酸瓊脂(LMG)：見附錄A.11。

4.2.12 緩沖MUG瓊脂(BMA)：見附錄A.12。

4.2.13 三(羥甲基)胺甲烷(Tris)緩沖劑：見附錄A.13

4.2.14 營養瓊脂斜面：見附錄A.14

4.2.15 色氨酸肉湯：見附錄A.15。

4.2.16 MR-VP培養基：見附錄A.16。

4.2.17 Korser氏枸椽酸鹽肉湯：見附錄A.17。

4.2.18 Kovacs氏靛基質試劑：見附錄A.18。

4.2.19 甲基紅指示劑：見附錄A.19

4.2.20 VP試劑(VP)：見附錄A.20。

4.2.21 革蘭氏染色液：見附錄A.21。

4.2.22 胰蛋白酶貯存液：見附錄A.22。

4.3 設備與材料

4.3.1 培養箱：36℃±1℃，44.5℃±0.5℃。

4.3.2 水浴箱：36℃±1℃，44.5℃±0.5℃。

4.3.3 冰箱：0℃~5℃和-15℃~-20℃。

4.3.4 均質器：渦旋式或拍擊式。

4.3.5 吸管：1mL，具0.1mL刻度;5mL和10mL，具1mL刻度

4.3.6 平皿：直徑90mm。

4.3.7 試管：16mm×160mm。

4.3.8 稀釋瓶：三角燒瓶、廣口瓶或其他適宜的容器。

4.3.9 玻璃小倒管：長度約20mm。

4.3.10 天平：感量0.1g。

4.3.11 顯微鏡。

4.3.12 菌落計數器。

4.3.13 濾器：備預濾器。

4.3.14 濾膜：有機或水相，孔徑0.45μm。

4.3.15 真空泵。

4.3.16 紫外燈：波長366nm。

4.4 樣品制備

4.4.1 固體或半固體樣品

無菌操作稱取樣品25g置于裝有225mL滅菌稀釋劑(4.2.1/4.2.2)的適宜容器中，充分振搖、混勻。或將剪碎后的試樣25g置于滅菌的均質杯/袋內，加亼225mL滅菌稀釋劑，以8000r/min~l0000r/min渦旋式均質lmin，或以6次/s~9次/s拍擊式均質lmin，制成1：10的樣品稀釋液備用。

4.4.2 液體樣品

以無菌吸管吸取樣品25mL置于裝有225mL滅菌稀釋劑的適宜容器中，以30cm幅度于7s內振搖25次或機械振蕩器中振搖。制成1：10的樣品稀釋液備用。

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