1 范圍

本標準規定了進出口食品中需氧菌及兼性厭氧菌的菌落總數計數方法。

本標準適用于各種進出口食品及其原料，有專門規定檢驗方法的除外。其他產品可參考使用本標準。

2 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

菌落總數 aerobic plate counts；APC

食品檢樣經過處理，在一定條件(如合適的培養基、溫度、時間等)下培養后，所得1mL(或1g)檢樣形成菌落的總數。本標準規定的培養條件下所得的結果，只包括一群在平板計數瓊脂上生長發育的嗜中溫需氧菌的菌落總數。

注：菌落總數是指產品中所有需氧微生物含量的高低，是衡量產品受污染程度的一項重要指標。

2.2 估計值 estimation of aerobic plate counts；EAPC

平板菌落計數的估計值。

2.3 菌落形成單位 colony-forming units；CFU

個細菌在平板計數瓊脂培養基上生長形成肉眼可見的菌落。

2.4 多不可計 too numerous to count；TNTC

平板上的菌落數太多而無法計數。

2.5 實驗室事故 laboratory accident；LA

實驗過程污染等導致結果無效的情況。

3 環境、設備和材料

3.1 環境要求：實驗室環境要求干浄、光照充足、通風良好，工作臺要平穩且臺面面積足夠大。需定期對工作區域內空氣中的微生物密度進行監測，可將傾注有瓊脂的平皿在空氣中暴露15min后放培養箱(36℃±1℃)中進行培養，48h后每個平皿上的菌落不能超過15個。

3.2 均質器和均質袋或均質杯。

3.3 天平：感量0.1g。

3.4 剪刀、鑷子、刀子、叉子或大湯勺：各實驗室可根據自己的愛好選擇，方便取樣即可。

3.5 玻璃平皿或塑料平皿：建議使用15mm×90mm的平皿。

3.6 滅菌吸管或移液器：量程分別為1mL、5mL和10mL，刻度為0.1mL。

3.7 帶橡膠塞或塑料螺旋帽的玻璃稀釋瓶：容量200mL。

3.8 恒溫水浴箱：45℃±1℃，用來融化凝固的瓊脂用。

3.9 恒溫培養箱：36℃±1℃。

3.10 冰箱：0℃~5℃。

3.11 冰柜：-20℃~-15℃。

3.12 合適溫度范圍的溫度計(已計量)。

4 培養基、試劑

4.1 平板計數瓊脂(參見附錄A.1)。

4.2 磷酸鹽緩沖稀釋液(參見附錄A.2)。

4.3 無菌生理鹽水(參見附錄A.3)。

4.4 1mol/L氫氧化鈉(NaOH)：稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL蒸餾水中。

5 程序

5.1 樣品制備

以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。

5.2 制備樣品勻液

5.2.1 固體或半固體樣品：以無菌操作，取25g或25mL樣品(根據樣品分布的均勻性程度，也可酌情增減樣品量，如50g或5σmL等)，放入裝有225mL稀釋劑(磷酸鹽緩沖稀釋液或無菌生理鹽水，以下同)的滅菌均質杯內，于8000r/min均質1min~2min，或放入盛有225mL稀釋劑的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min~2min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質時間超過2min，應在均質杯外加冰水冷卻。

5.2.2 干燥或干粉食品：以無菌操作取25g樣品，放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500m稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：10的樣品勻液。振搖時，幅度為30cm，7s內振搖25次，也可用機械振蕩器振蕩15s代替手搖。

5.2.3 液體樣品：用滅菌吸管吸取25mL樣品，放人裝有225mL稀釋劑的500mL稀釋瓶中，按5.2.2中所述方法迅速振搖，制成1：10的樣品勻液。吸取樣品時，吸管插入液面下不要超過2.5cm。吸管內液體要在2s~4s內完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。

5.3 稀釋樣品均液

5.3.1 取此樣品勻液1mL加到9mL的稀釋劑中，并以此類推，分別制成10-2，10-3，10-4三個連續稀釋度或其他合適稀釋度的樣品勻液，每個稀釋度換用一個新的無菌吸管。

5.3.2 所有樣品勻液都要在7s內沿直徑30cm的弧線搖動25次，搖動時要避免產生泡沫。

5.4 平板接種

5.4.1 每個稀釋度的樣品勻液各取1mL注人一個平皿，一式兩份，平皿預先要做適當的標記。如果樣品勻液在吸取前靜置時間超過了3min，要按上述方法再次搖動。

5.4.2 在原始樣品稀釋液制備后的15min內，每個平皿中注人12mL~15mL平板計數瓊脂(預先已放于45℃±1℃的水浴中恒溫)，即每個樣品從開始稀釋到傾注*后一個平皿所用的時間不得超過15min。每個稀釋度的樣品分別制兩個瓊脂平板。

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