1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)出口食品中需氧菌及兼性厭氧菌的菌落總數(shù)計(jì)數(shù)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種進(jìn)出口食品及其原料，有專門規(guī)定檢驗(yàn)方法的除外。其他產(chǎn)品可參考使用本標(biāo)準(zhǔn)。

2 術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

菌落總數(shù) aerobic plate counts；APC

食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件(如合適的培養(yǎng)基、溫度、時(shí)間等)下培養(yǎng)后，所得1mL(或1g)檢樣形成菌落的總數(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得的結(jié)果，只包括一群在平板計(jì)數(shù)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫需氧菌的菌落總數(shù)。

注：菌落總數(shù)是指產(chǎn)品中所有需氧微生物含量的高低，是衡量產(chǎn)品受污染程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

2.2 估計(jì)值 estimation of aerobic plate counts；EAPC

平板菌落計(jì)數(shù)的估計(jì)值。

2.3 菌落形成單位 colony-forming units；CFU

個(gè)細(xì)菌在平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成肉眼可見的菌落。

2.4 多不可計(jì) too numerous to count；TNTC

平板上的菌落數(shù)太多而無法計(jì)數(shù)。

2.5 實(shí)驗(yàn)室事故 laboratory accident；LA

實(shí)驗(yàn)過程污染等導(dǎo)致結(jié)果無效的情況。

3 環(huán)境、設(shè)備和材料

3.1 環(huán)境要求：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求干浄、光照充足、通風(fēng)良好，工作臺(tái)要平穩(wěn)且臺(tái)面面積足夠大。需定期對(duì)工作區(qū)域內(nèi)空氣中的微生物密度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可將傾注有瓊脂的平皿在空氣中暴露15min后放培養(yǎng)箱(36℃±1℃)中進(jìn)行培養(yǎng)，48h后每個(gè)平皿上的菌落不能超過15個(gè)。

3.2 均質(zhì)器和均質(zhì)袋或均質(zhì)杯。

3.3 天平：感量0.1g。

3.4 剪刀、鑷子、刀子、叉子或大湯勺：各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的愛好選擇，方便取樣即可。

3.5 玻璃平皿或塑料平皿：建議使用15mm×90mm的平皿。

3.6 滅菌吸管或移液器：量程分別為1mL、5mL和10mL，刻度為0.1mL。

3.7 帶橡膠塞或塑料螺旋帽的玻璃稀釋瓶：容量200mL。

3.8 恒溫水浴箱：45℃±1℃，用來融化凝固的瓊脂用。

3.9 恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。

3.10 冰箱：0℃~5℃。

3.11 冰柜：-20℃~-15℃。

3.12 合適溫度范圍的溫度計(jì)(已計(jì)量)。

4 培養(yǎng)基、試劑

4.1 平板計(jì)數(shù)瓊脂(參見附錄A.1)。

4.2 磷酸鹽緩沖稀釋液(參見附錄A.2)。

4.3 無菌生理鹽水(參見附錄A.3)。

4.4 1mol/L氫氧化鈉(NaOH)：稱取40g氫氧化鈉溶于1000mL蒸餾水中。

5 程序

5.1 樣品制備

以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。如有包裝，則用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。

5.2 制備樣品勻液

5.2.1 固體或半固體樣品：以無菌操作，取25g或25mL樣品(根據(jù)樣品分布的均勻性程度，也可酌情增減樣品量，如50g或5σmL等)，放入裝有225mL稀釋劑(磷酸鹽緩沖稀釋液或無菌生理鹽水，以下同)的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min均質(zhì)1min~2min，或放入盛有225mL稀釋劑的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過2min，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。

5.2.2 干燥或干粉食品：以無菌操作取25g樣品，放入裝有225mL稀釋劑和適量玻璃珠的500m稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：10的樣品勻液。振搖時(shí)，幅度為30cm，7s內(nèi)振搖25次，也可用機(jī)械振蕩器振蕩15s代替手搖。

5.2.3 液體樣品：用滅菌吸管吸取25mL樣品，放人裝有225mL稀釋劑的500mL稀釋瓶中，按5.2.2中所述方法迅速振搖，制成1：10的樣品勻液。吸取樣品時(shí)，吸管插入液面下不要超過2.5cm。吸管內(nèi)液體要在2s~4s內(nèi)完全排入稀釋劑中。不要在稀釋劑中吹洗吸管。

5.3 稀釋樣品均液

5.3.1 取此樣品勻液1mL加到9mL的稀釋劑中，并以此類推，分別制成10-2，10-3，10-4三個(gè)連續(xù)稀釋度或其他合適稀釋度的樣品勻液，每個(gè)稀釋度換用一個(gè)新的無菌吸管。

5.3.2 所有樣品勻液都要在7s內(nèi)沿直徑30cm的弧線搖動(dòng)25次，搖動(dòng)時(shí)要避免產(chǎn)生泡沫。

5.4 平板接種

5.4.1 每個(gè)稀釋度的樣品勻液各取1mL注人一個(gè)平皿，一式兩份，平皿預(yù)先要做適當(dāng)?shù)臉?biāo)記。如果樣品勻液在吸取前靜置時(shí)間超過了3min，要按上述方法再次搖動(dòng)。

5.4.2 在原始樣品稀釋液制備后的15min內(nèi)，每個(gè)平皿中注人12mL~15mL平板計(jì)數(shù)瓊脂(預(yù)先已放于45℃±1℃的水浴中恒溫)，即每個(gè)樣品從開始稀釋到傾注*后一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過15min。每個(gè)稀釋度的樣品分別制兩個(gè)瓊脂平板。

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