1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定人參中9種人參皂苷的高效液相色譜方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于人參中人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2和Rf的測(cè)定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T 15517.1 模壓紅參分等質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

3 原理

試樣經(jīng)乙醚脫脂后，用甲醇索氏提取提取后的樣液用SPEC8柱凈化，利用高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)對(duì)試樣中的9種人參皂苷進(jìn)行分離和測(cè)定，外標(biāo)法定量。

4 試劑和材料

除非有說(shuō)明，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682 中規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 70%乙醇溶液：取700mL無(wú)水乙醇，用去離子水稀釋至1000mL。

4.2 甲醇：色譜純。

4.3 乙醚。

4.4 人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品：Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、R(含量98%)。

4.5 標(biāo)準(zhǔn)混合溶液：逐一準(zhǔn)確稱取0.183gRe、O.163gRg1、0.102gRf、O.102gRg2、0.255gRbl、0.306gRc、0.367gRb2、0.408gRb3、0.214gRd(精確至0.0001g)人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成質(zhì)量濃度為1.8g/L、1.6g/L、1.0g/L、1.0g/L、2.5g/L、3.0g/L、3.6g/L、4.0g/L和2.1g/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯存在-18℃以下冰箱中，有效期6個(gè)月。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器

5.2 電子天平：感量為0.001g。

5.3 電子天平：感量為0.0001g。

5.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5.5 索氏提取器。

5.6 控溫水浴。

5.7 循環(huán)水多用真空泵。

5.8 粉碎機(jī)。

5.9 樣品篩：孔徑0.25mm。

5.10 SPE C18小柱：1000mg填料，6mL。

5.11 微量進(jìn)樣器：5HL~50μL。

6 試樣制備

按GB/T 15517.1-1995 中6.3的規(guī)定執(zhí)行。

7 分析步驟

7.1 樣品提取

準(zhǔn)確稱取人參干樣2g(精確至0.01g)，加入100mL乙醚于索氏提取器中，提取1h，棄去乙醚，待殘?jiān)幸颐褤]干后，再加入甲醇回餾8h。

7.2 樣品凈化

7.2.1 SPE C18 柱的預(yù)處理

先用20mL去離子水淋洗 SPE C18柱，然后用20mL的甲醇進(jìn)行活化，再用20mL去離子水平衡。待水與柱篩板近平時(shí)上樣。

7.2.2 提取液的處理

提取液在60℃水浴條件下，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈桑尤?mL去離子水充分搖勻。取2mL注入預(yù)先活化好的SPE C18柱中，待液面與柱篩板近平時(shí)，倒入10mL去離子水淋洗SPE C18柱，棄去流岀液待淋洗液液面與柱篩板近平時(shí)，加亼25mL乙醇溶液(4.1)洗脫 SPE C18柱，收集洗脫液于50mL刻度試管中，氮?dú)獯抵?5mL以下，用甲醇定容至25mL，混勻后，用0.2μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

7.3 測(cè)定

7.3.1 儀器參考條件

7.3.1.1 色譜柱：C18(4.6mm×300mm×0.5μm)或相當(dāng)者。

7.3.1.2 流動(dòng)相：甲醇十水。

7.3.1.3 柱溫：47℃。

7.3.1.4 流速：0.5mL/min~0.8mL/min。

7.3.1.5 檢測(cè)波長(zhǎng)：202nm。

7.3.1.6 進(jìn)樣量：10μL。

7.3.1.7 梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

7.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用混合皂苷標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.5)按著梯度洗脫程序進(jìn)行分析。準(zhǔn)確吸取0mL、2mL、4nL、6mL、8mL、10mL混合皂苷標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.5)，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，準(zhǔn)確吸取10μL各容量瓶中的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積。以各皂苷進(jìn)樣的質(zhì)量濃度對(duì)其峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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