1 范圍

GB/T9695的本部分規(guī)定了肉與肉制品中α-生育酚含量的測定方法。

本部分適用于肉與肉制品中α-生育酚含量的測定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過GB/T9695的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本部分。

GB/T6682-2008 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(ISO3696:1987,MOD)

3 原理

試樣經(jīng)皂化后,用石油醚提取不皂化的維生素E,濃縮后,用高效液相色譜儀測定,用外標(biāo)法計(jì)算試樣中a生育酚的含量。

4 試劑

如無特別說明,所用試劑均為分析純。

4.1 水:符合GB/T6682-2008規(guī)定的一級水

4.2 無水乙醇。

4.3 石油醚:沸程為30℃~60℃。

4.4 無水硫酸鈉。

4.5 異丙醇。

4.6 甲醇:色譜純或重蒸后使用。

4.7 氫氧化鉀溶液(c=500g/L):稱取50g氫氧化鉀溶于水中,用水稀釋至100mL

4.8 抗壞血酸溶液(c=100g/L):稱取10g抗壞血酸(維生素C),溶于水中,用水稀釋至100mL

4.9 α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):DL-α生育酚或DLα生育酚醋酸酯。

4.10 α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)溶液

4.10.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液(c≈1000g/mL)

4.10.1.1 若標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(49)為a生育酚,則稱取50.0mg,用異丙醇溶解,定容于50mL棕色容量瓶中。于4℃保存。臨用前用紫外分光光度計(jì)按4.10.3標(biāo)定其濃度

4.10.1.2 若標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(49)為a生育酚的酯類物質(zhì)則稱取50.0mg,按8.1~8.3進(jìn)行皂化、提取、濃縮,用異丙醇溶解,定容于50mL棕色容量瓶中。于4℃保存

4.10.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液

用異丙醇將已標(biāo)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4.10.1)稀釋成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作液臨用前配制。

4.10.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定

移取α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4.10.1)100μL于5mL具塞刻度試管中,用無水乙醇(4.2)稀釋至3.0mL。于波長294nm處用紫外分光光度計(jì)(5.3)測定α-生育酚的吸光值按式(1)計(jì)算出a生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4.10.1)的濃度:

式中:

α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度,單位為克每毫升(g/mL);

A—α-生育酚的紫外吸光值;

E——α-生育酚的1%比吸光系數(shù),即溶液濃度為1%光路為1cm時(shí)的吸收系數(shù),值為71;

V1—移取α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液的體積,單位為微升(pL)

5 儀器和設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器及下列儀器

5.1 機(jī)械設(shè)備:用于試樣的均質(zhì)化。包括高速旋轉(zhuǎn)的切割機(jī),或多孔板的孔徑不超過4mm的絞肉機(jī)。

5.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5.3 紫外分光光度計(jì)。

5.4 液相色譜儀:帶紫外光或熒光檢測器

6 取樣

實(shí)驗(yàn)室所收到的樣品應(yīng)具有代表性且在運(yùn)輸和儲藏過程中無受損或發(fā)生變化。

取樣方法參見GB/T9695.19。

取有代表性的樣品200g。

7 試樣制備

使用適當(dāng)?shù)臋C(jī)械設(shè)備(5.1)將試樣均質(zhì)。注意避免試樣的溫度超過25℃。若使用絞肉機(jī),試樣至少通過該設(shè)備兩次。將試樣裝入密封的容器里,防止變質(zhì)和成分變化。試樣應(yīng)在均質(zhì)化后24h內(nèi)盡快分析。

8 分析步驟

注:α-生育酚易被氧化,試驗(yàn)應(yīng)避光或充氮操作,并使用棕色玻璃儀器。

8.1 皂化

稱取0.5g~5g(準(zhǔn)確至0.001g)試樣于150mL燒瓶中,加入3mL抗壞血酸溶液(4.8)、5mL氫氧化鉀溶液(4.7)、30mL無水乙醇(4.2),混勻,于沸水浴上回流15min~30min,至試樣溶液澄清,皂化后用流水冷卻。

8.2 提取

將皂化后的試樣溶液移入125mL分液漏斗中,用30mL石油醚(4.3)分?jǐn)?shù)次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中,塞上塞子,輕搖分液漏斗,避免乳化。靜置,分層后,將水層放入第二個(gè)分液漏斗中,醚層留在**個(gè)分液漏斗中。于第二個(gè)分液漏斗中加入10mL石油醚(4.3),進(jìn)行第二次提取,石油瞇層并入**個(gè)分液漏斗中。重復(fù)提取3次~4次。石油醚層并入**個(gè)分液漏斗中石油醚層反復(fù)用水洗滌,至水層呈中性(pH約為7)。棄去水層。將分液漏斗中的石油醚層經(jīng)無水

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