1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中志賀氏菌( Shigella)的檢驗方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中志賀氏菌的檢驗。

2.設(shè)備和材料

除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:

a) 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1；

b) 冰箱:2℃～5℃；

c) 膜過濾系統(tǒng)；

d) 厭氧培養(yǎng)裝置:41.5℃±1℃；

e) 電子天平:感量0.1g；

f) 顯微鏡:10×~100×；

g) 均質(zhì)器；

h) 振蕩器；

i) 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1m刻度)或微量移液器及吸頭；

j) 無菌均質(zhì)杯或無菌均質(zhì)袋:容量500mL；

k) 無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm；

l) pH計或pH比色管或精密pH試紙；

m) 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素:見附錄A中A.1。

3.2 麥康凱(MAC)瓊脂:見附錄A中A.2。

3.3 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽(XLD)瓊脂:見附錄A中A.3。

3.4 志賀氏菌顯色培養(yǎng)基。

3.5 三糖鐵(TSI)瓊脂:見附錄A中A4。

3.6 營養(yǎng)瓊脂斜面:見附錄A中A.5。

3.7 半固體瓊脂:見附錄A中A6。

3.8 葡萄糖銨培養(yǎng)基:見附錄A中A.7

3.9 尿素瓊脂:見附錄A中A8。

3.10 β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基:見附錄A中A.9

3.11 氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基:見附錄A中A.10。

3.12 糖發(fā)酵管:見附錄A中A.1l。

3.13 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基:見附錄A中A.12。

3.14 粘液酸鹽培養(yǎng)基:見附錄A中A.13。

3.15 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑:見附錄A中A.14。

3.16 志賀氏菌屬診斷血清。

3.17 生化鑒定試劑盒。

4.檢驗程序

志賀氏菌檢驗程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 增菌

以無菌操作取檢樣25g(nL),加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min～10000rmin均質(zhì);或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)lmin～2min,液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±1℃,厭氧培養(yǎng)16h～20h。

5.2 分離

取增菌后的志賀氏増菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上,于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h,觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若岀現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察,則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表1。

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