1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中沙門氏菌( Salmonella)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)。

2.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下：

2.1 冰箱:2℃～5℃

2.2 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃,42℃±1℃C。

2.3 均質(zhì)器。

2.4 振蕩器。

2.5 電子天平:感量0.1g。

2.6 無菌錐形瓶:容量500mL,250mL。

2.7 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭。

2.8 無菌培養(yǎng)皿:直徑60mm,90mm。

2.9 無菌試管:3mm×50mm、10mm×75mm。

2.10 pH計或pH比色管或精密pH試紙。

2.11 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)。

2.12 無菌毛細(xì)管。

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 緩沖蛋白胨水(BPW):見A.1。

3.2 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液:見A.2。

3.3 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液:見A.3。

3.4 亞硫酸鉍(BS)瓊脂:見A.4。

3.5 HE瓊脂:見A.5。

3.6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂:見A.6。

3.7 沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。

3.8 三糖鐵(TSI瓊脂:見A.7。

3.9 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑:見A.8。

3.10 尿素瓊脂(pH7.2):見A.9。

3.11 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基:見A.10。

3.12 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基:見A.1l。

3.13 糖發(fā)酵管:見A.12。

3.14 鄰硝基酚βD半乳糖苷(ONPG)培養(yǎng)基:見A.13。

3.15 半固體瓊脂:見A.14。

3.16 丙二酸鈉培養(yǎng)基:見A.15。

3.17 沙門氏菌O、H和Vi診斷血清。

3.18 生化鑒定試劑盒。

4.檢驗(yàn)程序

沙門氏菌檢驗(yàn)程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 預(yù)增菌

無菌操作稱取25g(mL)樣品,置于盛有225 mL BPW的無菌均質(zhì)杯或合適容器內(nèi),以8000/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min,或置于盛有225 mL BPW的無菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打lmin~2min。若樣品為液態(tài),不需要均質(zhì),振蕩混勻。如需調(diào)整pH,用1mol/mL無菌NaOH或HCl調(diào)pH至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶或其他合適容器內(nèi)(如均質(zhì)杯本身具有無孔蓋,可不轉(zhuǎn)移樣品),如使用均質(zhì)袋,可直接進(jìn)行培養(yǎng),于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。

如為冷凍產(chǎn)品,應(yīng)在45℃以下不超過15min,或2℃～5℃不超過18h解凍。

5.2 增菌

輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物,移取1mL,轉(zhuǎn)種于10 mL TtB內(nèi),于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時,另取1mL,轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi),于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。

5.3 分離

分別用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液1環(huán),劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板(或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板),于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h~48h(BS瓊脂平板)或18h～24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板),觀察各個平板上生長的菌落,各個平板上的菌落特征見表1。

5.4 生化試驗(yàn)

5.4.1 自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落,接種三糖鐵瓊脂,先在斜面劃線,再于底層穿刺;接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板,于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h,必要時可延長至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi),沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見表2。

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