CFDA標(biāo)準(zhǔn)：BJS201602小麥粉中硫脲的測(cè)定
作者：百檢網(wǎng) 時(shí)間：2021-11-23 來源：互聯(lián)網(wǎng)
小麥粉中硫脲的測(cè)定
BJS201602
1?????????? 范圍
本方法規(guī)定了小麥粉中硫脲含量的高效液相色譜測(cè)定方法。
本方法適用于小麥粉中硫脲含量的測(cè)定。
2?????????? 原理
試樣經(jīng)提取、過濾、濃縮后，采用配有二*管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀檢測(cè)，外標(biāo)法定量；陽性樣品需用質(zhì)譜法進(jìn)行定性確認(rèn)。
3?????????? 試劑和材料
注：水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1乙腈（CH3CN)：色譜純。
3.1.2乙醇（C2H5OH）：分析純。
3.1.3乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。
3.1.4甲酸（HCOOH）：色譜純。
3.2 標(biāo)準(zhǔn)品
硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見表1，純度≥99%。
表1 硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量
中文名稱 | 英文名稱 | CAS登錄號(hào) | 分子式 | 相對(duì)分子量 |
硫脲 | Thiourea | 62-56-6 | CH4N2S | 76.12 |
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1硫脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取硫脲標(biāo)準(zhǔn)樣品（3.2）0.1 g（精確至0.000 1 g），用水溶解，并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個(gè)月。
3.3.2硫脲標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別準(zhǔn)確吸取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1），用水將其稀釋成硫脲含量分別為0.0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。臨用時(shí)配制。
3.4乙酸銨水溶液（25 mmol/L，含0.15%甲酸）：稱取1.925 g乙酸銨（3.1.3），加水溶解，加1.5 mL甲酸（3.1.4），定容至1 000 mL，經(jīng)微孔濾膜（3.5）過濾，待用。
3.5微孔濾膜：0.45 μm，有機(jī)相。
4?????????? 儀器和設(shè)備
4.1 高效液相色譜儀：配有二*管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。
4.2 超聲波清洗器。
4.3 渦旋混合儀。
4.4 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。
4.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
4.6 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥8 000 r/min。
5?????????? 分析步驟
5.1 試樣制備
準(zhǔn)確稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于25 mL具塞刻度試管中，加入5 mL水渦旋混勻，超聲5 min，加入乙醇（3.1.2）20 mL，混勻，超聲20 min后，用乙醇定容至刻度，濾紙過濾（如樣品渾濁或過濾較慢時(shí)，8 000 r/min離心5 min），取上層清液10 mL，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用2 mL流動(dòng)相（5.2.2）溶液復(fù)溶，再經(jīng)微孔濾膜（3.5）過濾，濾液進(jìn)液相色譜儀分析。
5.2 儀器參考條件
5.2.1色譜柱：HILIC柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm，或性能相當(dāng)者。
5.2.2流動(dòng)相：乙腈（3.1.1）+水，（90+10，v/v）。
5.2.3流速：1.0 mL/min。
5.2.4柱溫：25℃。
5.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)：246 nm。
5.2.6進(jìn)樣量：5 μL。
5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（3.3.2）分別按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的硫脲標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.4 試樣溶液的測(cè)定
將試樣溶液（5.1）按液相色譜參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的樣品溶液硫脲的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中硫脲的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。
硫脲的標(biāo)準(zhǔn)液相色譜圖參見附錄A的圖A.1。
5.5 定性確認(rèn)
如果試樣中的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品一致，則可初步確認(rèn)試樣中存在被測(cè)物質(zhì)硫脲，陽性試樣需用質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。
5.5.1 色譜條件
a）色譜柱：HILIC Silica色譜柱，100 mm×2.1 mm（i.d.），3 μm，或性能相當(dāng)者。
b）流動(dòng)相：流動(dòng)相A：乙腈（3.1.1），流動(dòng)相B：乙酸銨水溶液（3.4），梯度洗脫條件見表2。
表2梯度洗脫條件
時(shí)間（min） | A相/ % | B相/ % |
0 | 95 | 5 |
5 | 95 | 5 |
10 | 60 | 40 |
10.5 | 95 | 5 |
15 | 95 | 5 |
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c）流速：0.2 mL/min。
d）進(jìn)樣量：5 μL。
e）柱溫：25℃。
5.5.2 質(zhì)譜條件
a）電離方式：電噴霧正離子模式。
b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）。
c）霧化氣壓力：275.8 kPa。
d）干燥氣溫度：340℃。
e）干燥氣流速：10 L/min。
f）定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量見表3。
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表3 硫脲的定性離子對(duì)、定量離子、碎裂電壓和碰撞能量
中文名稱 | 母離子 (m/z) | 子離子 (m/z) | 碎裂電壓 ( V) | 碰撞能量 (eV) |
硫脲 | 77.1 | 60.0*；43.1 | 40 | 25/35 |
* ：定量離子
5.5.3 定性判定
按照上述條件測(cè)定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果試樣中的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；試樣中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過表4規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在硫脲。
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表4 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的*大允許偏差
相對(duì)離子豐度（%） | ＞50 | ＞20~50 | ＞10~20 | ≤10 |
允許的*大偏差（%） | ± 20 | ± 25 | ± 30 | ± 50 |
6?????????? 結(jié)果計(jì)算
試樣中硫脲含量按式（1）計(jì)算：
式中：
X—試樣中硫脲的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中硫脲的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V1—試樣提取過程中定容體積，單位為毫升（mL）；
V2—試樣提取后取上清液體積，單位為毫升（mL）；
V3—試樣濃縮后復(fù)溶體積，單位為毫升（mL）；
m—試樣稱取的質(zhì)量，單位為克（g）；
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
7?????????? 精密度
在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的**差值不得超過算術(shù)平均值的10%。
8?????????? 其他
當(dāng)稱樣量為2.00 g時(shí)，本方法檢出限為2 mg/kg，定量限為5 mg/kg。?
? ?附錄A?硫脲的高效液相色譜圖
? ?
圖A.1硫脲的高效液相色譜圖
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本方法負(fù)責(zé)起草單位：北京市食品安全監(jiān)控和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心（國(guó)家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)中心）。
驗(yàn)證單位：廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院、山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、河北省食品檢驗(yàn)研究院、南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院、國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（福州）。
主要起草人：孫龍、吳燕濤、張杉、張旭、邵明媛。