作者:小強(qiáng) 時(shí)間:2022-10-20 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)
食品產(chǎn)氣莢膜梭菌怎么檢測(cè)?目前對(duì)于食品產(chǎn)氣莢膜梭菌有對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。今天百檢網(wǎng)就給大家介紹一下食品產(chǎn)氣莢膜梭菌的測(cè)定方法相關(guān)信息。
檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù):GB 4789.13-2012 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)
1.范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌( Clostridium perfringens)的檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)。
2.設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
a) 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃;
b) 冰箱:2℃~5℃;
c) 恒溫水浴箱:50℃±1℃,46℃±0.5℃;
d) 天平:感量0.1g;
e) 均質(zhì)器;
f) 顯微鏡:10×~100×;
g) 無(wú)菌吸管:1mL(具0.0lmL刻度)、10mL(具0.lmL刻度)或微量移液器及吸頭;
h) 無(wú)菌試管:18mmx180mm;
i) 無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑90mm;
j) pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙;
k) 厭氧培養(yǎng)裝置。
3.培養(yǎng)基和試劑
3.1 胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂:見(jiàn)附錄A中A.1。
3.2 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTG):見(jiàn)附錄A中A.2。
3.3 緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基:見(jiàn)附錄A中A.3。
3.4 乳糖-明膠培養(yǎng)基:見(jiàn)附錄A中A4。
3.5 含鐵牛乳培養(yǎng)基:見(jiàn)附錄A中A5。
3.6 0.1%蛋白胨水:見(jiàn)附錄A中A.6。
3.7 革蘭氏染色液:見(jiàn)附錄A中A.7。
3.8 硝酸鹽還原試劑:見(jiàn)附錄A中A8。
3.9 緩沖甘油-氯化鈉溶液:見(jiàn)附錄A中A.9。
4.檢驗(yàn)程序
產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖1。
5.操作步驟
5.1 樣品制備
5.1.1 樣品采集后應(yīng)盡快檢驗(yàn),若不能及時(shí)檢驗(yàn),可在2℃~5℃保存;如8h內(nèi)不能進(jìn)行檢驗(yàn),應(yīng)以無(wú)菌操作稱取25g(mL)樣品加入等量緩沖甘油-氯化鈉溶液(液體樣品應(yīng)加雙料),并盡快至于-60℃低溫冰箱中冷凍保存或加干冰保存。
5.1.2 以無(wú)菌操作稱取25g(mL)樣品放入含有225mL0.1%蛋白胨水(如為51.1中冷凍保存樣品,室溫解凍后,加入200mL0.1%蛋白胨水)的均質(zhì)袋中,在拍擊式均質(zhì)器上連續(xù)均質(zhì)1min~2min;或置于盛有225mL0.1%蛋白胨水的均質(zhì)杯中,8000r/min~10000rmin均質(zhì)1min~2min,作為1:10稀釋液。
5.1.3 以上述1:10稀釋液按1mL加0.1%蛋白胨水9mL制備10-2~10-6的系列稀釋液。
5.2 培養(yǎng)
5.2.1 吸取各稀釋液1mL加入無(wú)菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平行。每個(gè)平皿傾注冷卻至50℃的TSC瓊脂(可放置于50℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)15mL,緩慢旋轉(zhuǎn)平皿,使稀釋液和瓊脂充分混勻。
5.2.2 上述瓊脂平板凝固后,再加10mL冷卻至50℃的TSC瓊脂(可放置于50℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)均勻覆蓋平板表層。
5.2.3 待瓊脂凝固后,正置于厭氧培養(yǎng)裝置內(nèi),36℃±1℃培養(yǎng)20h~24h。
5.2.4 典型的產(chǎn)氣莢膜梭菌在TSC瓊脂平板上為黑色菌落。
5.3 確證試驗(yàn)
5.3.1 從單個(gè)平板上任選5個(gè)(小于5個(gè)全選)黑色菌落,分別接種到FTG培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h
5.3.2 用上述培養(yǎng)液涂片,革蘭氏染色鏡檢并觀察其純度。產(chǎn)氣莢膜梭菌為革蘭氏陽(yáng)性粗短的桿菌,有時(shí)可見(jiàn)芽孢體。如果培養(yǎng)液不純,應(yīng)劃線接種TSC瓊脂平板進(jìn)行分純,36℃±1℃厭氧培養(yǎng)20h~24h挑取單個(gè)典型黑色菌落接種到FTG培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,用于后續(xù)的確證試驗(yàn)。
5.3.3 取生長(zhǎng)旺盛的FTG培養(yǎng)液1mL接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基,在46℃±0.5℃水浴中培養(yǎng)2h后,每小時(shí)觀察一次有無(wú)“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象,該現(xiàn)象的特點(diǎn)是乳凝結(jié)物破碎后快速形成海綿樣物質(zhì),通常會(huì)上升到培養(yǎng)基表面。5h內(nèi)不發(fā)酵者為陰性。產(chǎn)氣莢膜梭菌發(fā)酵乳糖,凝固酪蛋白并大量產(chǎn)氣,呈“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象,但培養(yǎng)基不變黑。
5.3.4 用接種環(huán)(針)取FrG培養(yǎng)液穿刺接種緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基,于36℃±1℃培養(yǎng)24h。在透射光下檢査細(xì)菌沿穿刺線的生長(zhǎng)情況,判定有無(wú)動(dòng)力。有動(dòng)力的菌株沿穿刺線呈擴(kuò)散生長(zhǎng),無(wú)動(dòng)力的菌株只沿穿刺線生長(zhǎng)。然后滴加0.5mL試劑甲和0.2mL試劑乙以檢査亞硝酸鹽的存在。15min內(nèi)出現(xiàn)紅色者,表明硝酸鹽被還原為亞硝酸鹽;如果不岀現(xiàn)顏色變化,則加少許鋅粉,放置10min,出現(xiàn)紅色者,表明該菌株不能還原硝酸鹽。產(chǎn)氣莢膜梭菌無(wú)動(dòng)力,能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。
5.3.5 用接種環(huán)(針)取FTG培養(yǎng)液穿刺接種乳糖-明膠培養(yǎng)基,于36℃±1℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣和培養(yǎng)基由紅變黃,表眀乳糖被發(fā)酵并產(chǎn)酸。將試管于5℃左右放置1h,檢査明膠液化情況。
如果培養(yǎng)基是固態(tài),于36℃±1℃再培養(yǎng)24h,重復(fù)檢査明膠是否液化。產(chǎn)氣莢膜梭菌能發(fā)酵乳糖,使明膠液化。
………………
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