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食品副溶血性弧菌測定方法介紹

作者:小強(qiáng) 時(shí)間:2022-10-20 來源:互聯(lián)網(wǎng)

食品副溶血性弧菌怎么檢測?目前對于食品副溶血性弧菌有對應(yīng)的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。今天百檢網(wǎng)就給大家介紹一下食品副溶血性弧菌的測定方法相關(guān)信息。

檢測方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù):GB 4789.7-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中副溶血性弧菌( Vibrio parahaemolyticus)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中副溶血性弧菌的檢驗(yàn)。

2.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:

a) 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃;

b) 冰箱:2℃~5℃、7℃~10℃;

c) 恒溫水浴箱:36℃±1℃;

d) 均質(zhì)器或無菌乳缽;

e) 天平:感量0.1g;

f) 無菌試管:18mm×180mm、15mm×100mm;

g )無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭;

h) 無菌錐形瓶:容量250mL、500mL、1000mL;

i) 無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm;

j) 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng);

k) 無菌手術(shù)剪、鑷子;

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 3%氯化鈉堿性蛋白胨水:見附錄A中A.1。

3.2 硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖(TCBS)瓊脂:見附錄A中A2。

3.3 3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂:見附錄A中A.3。

3.4 3%氯化鈉三糖鐵瓊脂:見附錄A中A4。

3.5 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A.5。

3.6 3%氯化鈉甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A6。

3.7 3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A.7。

3.8 3%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基:見附錄A中A8。

3.9 3%氯化鈉溶液:見附錄A中A9。

3.10 我妻氏血瓊脂:見附錄A中A.10。

3.11 氧化酶試劑:見附錄A中A.11。

3.12 革蘭氏染色液:見附錄A中A.12。

3.13 ONPG試劑:見附錄A中A.13。

3.14 Voges-Proskauer(V-P)試劑:見附錄A中A.14。

3.15 弧菌顯色培養(yǎng)基。

3.16 生化鑒定試劑盒。

4.檢驗(yàn)程序

副溶血性弧菌檢驗(yàn)程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 樣品制備

5.1.1 非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置7℃~10℃冰箱保存,盡可能及早檢驗(yàn);冷凍樣品應(yīng)在45℃以下不超過15min或在2℃~5℃不超過18h解凍。

5.1.2 魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部內(nèi)容物,包括貝肉和體液;甲殼類取整個(gè)動物,或者動物的中心部分,包括腸和鰓。如為帶殼貝類或甲殼類,則應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分,然后以無菌操作打開外殼,按上述要求取相應(yīng)部分。

5.1.3 以無菌操作取樣品25g(mL),加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min均質(zhì)lmin,或拍擊式均質(zhì)器拍擊2min,制備成1:10的樣品勻液。如無均質(zhì)器,則將樣品放入無菌乳缽,225mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水中取少量稀釋液加入無菌乳缽,樣品磨碎后放入500mL無菌錐形瓶,再用少量稀釋液沖洗乳缽中的殘留樣品1~2次,洗液放入錐形瓶,*后將剩余稀釋液全部放入錐形瓶,充分振蕩,制備1:10的樣品勻液。

5.2 增菌

5.2.1 定性檢測

將5.13制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)8h~18h。

5.2.2 定量檢測

5.2.2.1 用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi),振搖試管混勻,制備1:100的樣品勻液。

5.2.2.2 另取lm無菌吸管,按5.2.2.1操作程序,依次制備10倍系列稀釋樣品勻液,每遞增稀釋次,換用一支1mL無菌吸管。

5.2.2.3 根據(jù)對檢樣污染情況的估計(jì),選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種3支含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管,每管接種1mL。置36℃±l℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)8h~18h。

………………

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