1范圍

本標準規(guī)定了化學品魚類急性毒性試驗的術(shù)語和定義、受試物信息、方法原理、試驗準備、試驗、質(zhì)量控制、數(shù)據(jù)與報告

本標準適用于測試和評價化學品的魚類急性毒性.

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件.

2.1靜態(tài)試驗 static test以整個試驗過程中試驗介質(zhì)不更換、不流動的方式進行的試驗。

2.2半靜態(tài)試驗 semi-static test以定期(如24 h)更換試驗介質(zhì)的方式進行的試驗。

2.3旅水式試驗flow-through test以整個試驗過程中試驗介質(zhì)自動、持續(xù)地被更換的方式進行的試驗。

2.4半數(shù)致死濃度median lethal concentration引起50%的受試魚死亡的受試物濃度，以LCso表示。

3受試物信息

受試物信息包括，a)水中溶解度;b)溶液中定量分析方法;c)結(jié)構(gòu)式;d)純度

)水中和光中的穩(wěn)定性;f)pK.值;

8)正辛醇-水分配系數(shù)(P.);h)蒸氣壓;

)快速生物降解結(jié)果。

4方法原理

魚類急性毒性試驗用于評價受試物對魚類可能產(chǎn)生的影響，以短期暴露效應(yīng)表明受試物的危害性。

GB/T 27861-2011將魚暴露于不同濃度的受試物溶液，以96 h為試驗周期，在24 h.48 h、72 h和96 h時記錄魚的死亡率，分別確定50%試驗魚死亡時的受試物濃度，用LCGo表示。

5試驗準備

5.1 儀器設(shè)備

儀器設(shè)備至少包括：a)溶解氧測定儀;b)水硬度計;c)溫度控制儀;d)化學惰性材料制成的水族箱或水槽，規(guī)格一致，體積適宜;e)pHi.

5.2試驗生物選擇

選用一個或多個魚種，根據(jù)需要自行選擇。建議根據(jù)全年可得、易于飼養(yǎng)、方便試驗等原則，并結(jié)合相關(guān)的經(jīng)濟、生物或生態(tài)因素等來確定魚種。試驗用魚應(yīng)健康，無明顯的畸形.

推薦試驗用魚可參見附錄A中表A.1，表格中的魚種都為全年可得、易于飼養(yǎng)。可在養(yǎng)魚場或?qū)嶒炇抑屑膊∨c寄生蟲控制的條件下進行馴化和飼養(yǎng)，使試驗魚保持健康，遺傳清晰。這些魚種在世界許多地方都可找到，若使用其他符合以上標準的魚種，試驗方法應(yīng)作相應(yīng)調(diào)整以提供合適的試驗條件。

5.3試驗魚的馴養(yǎng)

試驗魚用于試驗之前，應(yīng)在實驗室至少暫養(yǎng)12d.臨試驗前，應(yīng)在符合下列條件的環(huán)境中至少馴養(yǎng)7d：一水：與試驗用水相同;

-光照：每天12 h~16 h光照;

-溫度：與試驗魚種相適宜(參見附錄A中表A.1);溶解氧濃度：不小于80%空氣飽和值;

-喂養(yǎng)：每周3次或每天投食，至試驗開始前24 h為止。

馴養(yǎng)開始48 h后，記錄死亡率，并按下列標準處理：

--7d內(nèi)，死亡率大于10%，舍棄整批魚;

-7 d內(nèi)，死亡率在5%~10%之間，繼續(xù)馴養(yǎng)7d;

-7d內(nèi)，死亡率小于5%，可用于試驗。

5.4 試驗用水

使用高質(zhì)量的自然水或標準稀釋水(參見附錄B)，也可以使用飲用水，必要時應(yīng)除氯。水的總硬度

(以CaCO，計)為10 mg/L~250 mg/L，pH值為6.0~8.5，用于配制標準稀釋水的試劑應(yīng)為分析純，去離子水或蒸餾水的電導(dǎo)率應(yīng)小于或等于10pS/cm.

5.5試驗溶液

通過稀釋貯備液配制試驗溶液。低水溶性物質(zhì)的貯備液可以通過超聲分散或其他適合的物理方法配制，必要時可使用對魚毒性低的有機溶劑、乳化劑或分散劑來助溶。使用這些物質(zhì)時應(yīng)加設(shè)助溶劑對照試驗，對照組助溶劑濃度應(yīng)為試驗組使用助溶劑的*高濃度，并且不得超過100mg/L.

不需調(diào)節(jié)試驗溶液的pH值。如果加入受試物后試驗溶液的pH值有明顯變化，建議重新配制，調(diào)節(jié)受試物貯備液的pH值，使其接近加入受試物前稀釋水的pH值，用于調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)不應(yīng)使貯備液的濃度明顯改變，也不應(yīng)與受試物發(fā)生化學反應(yīng)或產(chǎn)生沉淀，*好使用HCI和NaOH來調(diào)節(jié).

6試驗

6.1 暴露條件

暴露條件包括：

-持續(xù)時間：96 h;

-承載量：靜態(tài)和半靜態(tài)試驗系統(tǒng)試驗魚的*大承載量為1.0g/L，流水式試驗系統(tǒng)承載量可高一些

-光照;每天12h-16 h;

-溫度：與試驗魚種相適宜(參見附錄A中表A.1)，保持恒定，變化范圍±2℃;

-溶解氧：不小于60%空氣飽和值，若不會導(dǎo)致受試物明顯損失時可進行驟氣;

-喂食：不進行;

-干擾：避免可能改變魚行為的干擾。

6.2 試驗魚數(shù)量

空白對照組與各試驗濃度組應(yīng)每組至少7尾魚。

6.3試驗濃度設(shè)置

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果來選擇正式試驗合適的濃度范圍，至少應(yīng)設(shè)置5個濃度組，并以幾何級數(shù)排布，公比應(yīng)不大于2.2.

6.4 試驗對照組設(shè)置

每一系列設(shè)一個空白對照，如使用了助溶劑，應(yīng)增設(shè)一個助溶劑對照.

6.5觀察

至少在24 h.48 h，72h和96h后檢查試驗魚的狀況。如果試驗魚沒有任何肉眼可見的運動，如魏的扇動，以及碰觸尾部后無反應(yīng)，即可判斷該魚已死亡。觀察并記錄死魚數(shù)目后，將死魚從容器中移去。

*好在試驗開始后3h及6h時觀察各試驗組魚的狀況。記錄可見的試驗魚異常情況(如平衡能力喪失，游泳能力和呼吸功能減弱，顏色變淺等)

每天至少測定一次pH值、溶解氧和溫度。

6.6 限度試驗

應(yīng)用本標準時，為證明LCso> 100 mg/L，可以進行濃度為100 mg/L(有效成分)的限度試驗。限度試驗組至少使用7尾魚，與對照組使用的魚數(shù)目相等。二項式理論表明：使用10尾魚，沒有1尾魚死亡，那么LCso>100 mg/L的概率為99.9%;使用7尾、8尾或9尾魚，沒有1尾魚死亡，那么LCso>

100 mg/L的概率至少為99%，如果試驗魚發(fā)生死亡，則應(yīng)按本標準的試驗程序進行完整的試驗.若觀察到亞致死效應(yīng)，應(yīng)進行記錄.