作者:荀彧 時間:2022-12-05 來源:互聯(lián)網(wǎng)
大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3Elisa試劑盒ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
規(guī)格:48T 96T
檢 測 范 圍 :7pg/ml-220pg/ml
使 用 目 的 :本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中小反芻獸疫抗體(PPRAb)含量。
標(biāo) 本 要 求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3Elisa試劑盒試劑及試劑配制
1. 抗原及酶標(biāo)記抗體
①抗原: IgG
②酶標(biāo)抗抗體:羊抗鼠IgG-HRP
2.包被液(CBS):Na2CO3 0.8g,NaHCO3 1.46g,水溶解,定容500ml。
3. 封閉液(3%BSA+CBS 或5%牛奶+CBS):含3%牛血清白蛋白(BSA):10mL CBS中加入0.3g BSA。含5%荷蘭牛奶:10mL CBS中加入0.5g牛奶 。
4. 洗滌液(PBST 10*):KH2PO4 4g,Na2HPO4·12H2O 58g,NaCl 160g, KCl 4g,Tween-20 10mL 加水定容2L。
5. 洗滌液(1*PBS): PBST:H2O=1:9
6. 底物溶液(4甲基酰苯氨) ①TMB底物緩沖液(0.005mol/LPH3.6醋酸鈉-檸檬酸緩沖液):稱NaAc·3H2O:1.13g,C6H8O7·H2O :1.05g,用蒸餾水溶解,定容至1000mL,調(diào)PH=3.6。 ② TMB底物液:稱3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)0.08g 溶于40mL 二甲基亞砜(DMSO)中,加60 mL 甲醇,混勻,加100mL 底物緩沖液,在暗處避光攪拌2小時至溶解,4℃避光保存。 ③H2O2 底物液:取140μL過氧化氫(H2O2)加入200mL底物緩沖液混勻。 ④底物應(yīng)用液:現(xiàn)用現(xiàn)配,TMB:H2O2=1:1混勻。
7. 終止液:2mol/L H2SO4
操作步驟
①抗原包被過夜(12h以上): IgG抗原,用包被液(CBS)稀釋,100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。 抗原用量:0.1μg*100N/抗原濃度 (N為板數(shù))
②封閉:棄上清 加300μL/孔封閉液,37℃放置2h。
③洗滌:用洗滌液洗3次
④加一抗(待測樣品為細(xì)胞培養(yǎng)上清):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清100μL /孔加到已包被的板上,空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品血清(1:200稀釋于1%BSA+PBST中)作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。 測免疫效價待測樣品為小鼠血清時:采小鼠血液于常溫20min左右后放4℃至析出血清,3000r 10min離心。將含抗體的血清在已包被的板上用1%BSA+PBST連續(xù)倍比稀釋(按照1:200開始),100μL /孔。每個樣品平行做兩份,小鼠陰性血清或空白培養(yǎng)基作為陰性對照,已知樣品作為陽性對照。37℃恒溫箱溫育2h。
⑤洗滌:用洗滌液洗5次。
⑥加二抗(酶標(biāo)抗抗體):羊抗鼠IgG-HRP,用1%BSA+PBST l :10000稀釋,100μL/孔, 37℃恒溫箱溫育1h。
⑦洗滌:用洗滌液洗5次,
⑧顯色:加新鮮配制的底物溶液(TMB:H2O2=1:1)100μL/孔,37℃恒溫箱放置10min,顯示藍(lán)色。
⑨終止反應(yīng)、比色:加30μL/孔H2SO4終止液.顏色變黃;用酶標(biāo)儀測定450nm 630nm處各孔的吸光值,陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測樣品的效價。
相關(guān)產(chǎn)品如下:
小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49
小鼠胚胎成骨細(xì)胞 MC3T3-E1
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF
小鼠前胃癌細(xì)胞 MFC
小鼠肝上皮細(xì)胞 NCTC clone 1469
小鼠正常肝細(xì)胞 NCTC1469
小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 neuro-2a
小鼠胚胎細(xì)胞 NIH/3T3
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 OP9
小鼠畸胎瘤細(xì)胞 P19
小鼠白血病細(xì)胞 P388
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株 PT-67
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 RAW 264.7
小鼠腎癌細(xì)胞 RENCA
小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 RGC-5
小鼠雜交瘤 SDOW-17
小鼠胚胎干細(xì)胞 SOX1-GFP
小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Sp2/0
小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Sp2/0-Ag14
小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40-MES-13
小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞 SVEC4-10
小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞 TM3
正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞 TM4
小鼠子宮頸癌細(xì)胞 U14
小鼠淋巴瘤細(xì)胞 YAC-1
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 MC38
小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞 STC-1
大鼠視網(wǎng)膜muller細(xì)胞 muller
大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞 A7r5
大鼠肝細(xì)胞 BRL-3A
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6
大鼠肝星形細(xì)胞 CFSC-8B
大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX
大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX-TNA
大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞 DI TNC1
大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 DRG
大鼠垂體瘤細(xì)胞 GH3
大鼠心肌細(xì)胞 H9C2
大鼠心肌細(xì)胞 H9c2(2-1)
大鼠腎小球系膜細(xì)胞 HBZY-1
永生型大鼠肝儲脂細(xì)胞 HSC-T6
大鼠回腸細(xì)胞 IEC-18
大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞 IEC-6
大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞 IEC-6 BHS
大鼠乳腺癌細(xì)胞 MADB106
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞 NR8383
大鼠腎細(xì)胞 NRK-52E
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 低分化 PC12低分化
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 高分化 PC12高分化
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 未分化 PC12未分化
大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞 RBL-2H3
大鼠肝癌細(xì)胞 RH-35
大鼠β胰島素瘤細(xì)胞 RIN-m5f
倉鼠腎成纖維細(xì)胞 BHK-21
中國倉鼠肺細(xì)胞 CHL
倉鼠卵巢細(xì)胞 CHO
中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1
中國倉鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 IG-24
倉鼠卵巢細(xì)胞 LEC-1
倉鼠肺細(xì)胞 V79
豬肺泡巨噬細(xì)胞 3D4/21
1、檢測行業(yè)全覆蓋,滿足不同的檢測;
2、實驗室全覆蓋,就近分配本地化檢測;
3、工程師一對一服務(wù),讓檢測更精準(zhǔn);
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6、周期短,費用低,服務(wù)周到;
7、擁有CMA、CNAS、CAL等權(quán)威資質(zhì);
8、檢測報告權(quán)威有效、中國通用;
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