1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜂膠中蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、髙良姜素含量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂膠中蘆了、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、高良姜素含量的測(cè)定。

本標(biāo)準(zhǔn)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的檢出限:蘆丁為0.15g/kg;楊酶酮為0.050g/kg;槲皮素、髙良姜素為0.025g/kg;莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因?yàn)?.0060g/kg。液相色譜法的檢出限:楊梅酮、莰菲醇芹菜素、苛因?yàn)?.10g/kg;蘆丁、槲皮素、松屬素、高良姜素為0.20g/kg。

2.規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 6379 測(cè)試方法的精密度 通過實(shí)驗(yàn)室間試驗(yàn)確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法的重現(xiàn)性和再現(xiàn)性(GB/T 6379-1986,neq ISO 5725:1981)

GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3.原理

甲醇溶解試樣,反相液相色譜柱分離黃酮化合物,八種黃酮化合物用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定或用高效液相色譜紫外檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。

4.試劑和材料

除另有說明外,所用試劑均為優(yōu)級(jí)純,水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1 甲醇:色譜純。

4.2 磷酸。

4.3 甲醇+水(1+1):量取50mL甲醇與50mL水混合。

4.4 蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因和高良姜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度≥99%。

4.5 蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因和高良姜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取適量的每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.4),用甲醇(4.1)配制成濃度為0.10mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

4.6 蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因和髙良姜素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:根據(jù)需要用甲醇(4.1)和甲醇十水(4.3)將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(4.5)分別稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

5.儀器

5.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源。

5.2 高效液相色譜儀:配有紫外檢測(cè)器。

5.3 溫度可調(diào)超聲波水浴。

5.4 注射過濾器:容積為3mL或5mL,并帶有0.45μm過濾膜。

5.5 微量注射器:25μL。

6.分析步驟

6.1 試樣溶液的制備

稱取0.1g～0.2g試樣,精確到0.001g,置于50mL容量瓶內(nèi),加入40mL甲醇,在60℃的超聲波水浴中,振蕩40min,待樣品完全溶解后,取出冷卻至室溫。然后用甲醇定容至50mL～100mL,搖勻。用注射過濾器將試樣溶液過濾至樣品瓶內(nèi),搖勻后,供液相色譜儀測(cè)定。過濾的樣液取1mL與1mL水混合后,供液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

6.2 測(cè)定

6.2.1 液相色譜條件

6.2.1.1 串聯(lián)質(zhì)譜法

a) 色譜柱: Mightysil RP-18 3μm 150mm×4.6mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者;

b) 流動(dòng)相:甲醇+水(65+35),用磷酸(4.2)調(diào)節(jié)流動(dòng)相至pH=3;

c) 流速:0.3mL/min;

d) 進(jìn)樣量:20μL。

6.2.1.2 紫外檢測(cè)法

a) 色譜柱: Mightysil RP-18 3μm 150mm×4.6mm(內(nèi)徑)或相當(dāng)者;

b) 流動(dòng)相:甲醇+水(58+42),用磷酸(4.2)調(diào)節(jié)流動(dòng)相至pH=3;

c) 流速:0.7mL/min;

d) 檢測(cè)波長:270nm;

e) 進(jìn)樣量:10μL。

6.2.2 質(zhì)譜條件

a) 掃描方式:正離子掃描;

b) 檢測(cè)方式:多反應(yīng)檢測(cè);

c) 電噴霧電壓:4000V;

d) 霧化氣壓力:0.055MPa;

e) 氣簾氣壓力:0.069MPa;

f) 輔助氣流速:6L/min;

g) 離子源溫度:380℃;

h) 去簇電壓:100V;

i) 定性離子對(duì)、定量離子對(duì)和碰撞氣能量,見表1。

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