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金黃色葡萄球菌的鑒定方法

作者:宋檢 時(shí)間:2022-10-21 來(lái)源:互聯(lián)網(wǎng)

由于目前全球化的發(fā)展,世界各地區(qū)之間的人流物流日益廣泛和頻繁,病原菌也會(huì)隨著這種流動(dòng)而迅速擴(kuò)散,并且不像以前要由鄰接地區(qū)由近而遠(yuǎn)的擴(kuò)散,而是直接跨越地區(qū)、造成國(guó)家之間乃至洲之間的迅速擴(kuò)散。因此,將先進(jìn)的技術(shù)和檢測(cè)方法應(yīng)用于我們的實(shí)際工作,可準(zhǔn)確的檢測(cè)和有效預(yù)防因金黃色葡萄球菌引起的食物中毒及各類感染性疾病。現(xiàn)就其檢測(cè)方法做一總結(jié)。

1 傳統(tǒng)常規(guī)培養(yǎng)檢測(cè)方法

1.1 直接涂片鏡檢

取標(biāo)本涂片,革蘭氏染色后鏡檢,可見球形、單個(gè)、成對(duì)和葡萄串狀排列,革蘭氏染色陽(yáng)性,無(wú)芽胞,無(wú)莢膜。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、排列和染色性可作出初步診斷。

1.2 分離培養(yǎng)與鑒定

將標(biāo)本接種于血瓊脂平板,經(jīng)37℃培養(yǎng)24h后形成圓形、光滑、大而凸起、濕潤(rùn)、不透明的菌落,菌落呈金黃色或者白色,有透明溶血環(huán)。接種甘露醇培養(yǎng)基經(jīng)37℃培養(yǎng)24h后,形成淡橙黃色菌落。在Baerd-Parker平板中經(jīng)37℃培養(yǎng)24h后,菌落為圓形、光滑突起、濕潤(rùn),顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一渾濁帶,在其外層有一透明圈。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性,可在7.5%氯化鈉肉湯中生長(zhǎng),因此利用它的這個(gè)特性進(jìn)行污染標(biāo)本的分離。在純培養(yǎng)分離好的平板上挑取菌落配置菌懸液,在VITEK2微生物鑒定系統(tǒng)用GP卡鑒定。

1.3 血漿凝固酶試驗(yàn)

吸取0.5ml 兔血漿與0.5ml金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24h 培養(yǎng)物充分混勻,置36±1℃培養(yǎng),每隔30min 觀察一次,連續(xù)觀察6h,出現(xiàn)凝固,即將小試管傾斜或倒置時(shí),內(nèi)容物不流動(dòng),判為陽(yáng)性。同時(shí)做陰陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 耐熱核酸酶試驗(yàn)

將24h 肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min,用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA 平板,(36±1)°C 培養(yǎng)24h,在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽(yáng)性。本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性。

金黃色葡萄球菌的傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法經(jīng)典、可靠,仍是實(shí)驗(yàn)室一直沿用的檢測(cè)方法。但操作復(fù)雜,所需事間長(zhǎng),尤其在突發(fā)公共衛(wèi)生事件需要進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和溯源時(shí),很難滿足準(zhǔn)確、快速溯源的需要。

2 對(duì)金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測(cè)方法

2.1從分離菌株培養(yǎng)物中提取葡萄球菌腸毒素
待測(cè)菌株接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)24h,用5ml生理鹽水洗下菌落,傾入60ml產(chǎn)毒培養(yǎng)基中,每個(gè)菌種種一瓶,37℃震蕩培養(yǎng)48h,震速為100次/min,吸出菌液,100℃加熱10min,8000r/min離心20min,取上清液100ul進(jìn)行試驗(yàn)。

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