1 提取和凈化

樣品提取溶劑的選擇取決于黃曲霉毒素自身的物化性質，一般用到的提取溶劑有甲醇、乙腈的水溶液，盡管早期的方法中經常用到氯仿，但考慮到氯仿對環境的影響，現已基本上被替代；一些新的提取技術，如超臨界流體萃取[1,2]、加壓流體萃取（加速流體萃取）[3]被用于黃曲霉毒素的提取，但是超臨界流體的提取物常有大量的雜質，而加壓流體萃取設備價格昂貴，限制了其廣泛使用。

樣品的提取溶液中常含有共提取物，給黃曲霉毒素的檢測帶來干擾和基質效應。為了排除基質對分離和檢測的干擾，常用的凈化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫親和柱和多功能凈化柱。對于含油量大的樣品，常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油；傳統固相萃取柱在黃曲霉毒素凈化方面的應用較早，填料主要有C18、硅膠、弗洛里硅土、氧化鋁等，但由于選擇性差，且往往既耗時又浪費溶劑，因此不及免疫親和柱和多功能凈化柱應用廣，而微型固相萃取柱的應用便于建立簡單快速、成本低廉的前處理方法。Mahoney[4]等采用硅膠柱（30 mg/3 mL）建立了簡單可靠的方法來分析檢測來自不同植物源的油中黃曲霉毒素，結果表明硅膠柱可以選擇性保留植物油中的黃曲霉毒素；Sobolev[5]使用自制氧化鋁柱（200 mg/1.5 mL）用于來凈化檢測主要農產品（玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英國胡桃、巴西堅果、阿月渾果）中的黃曲霉毒素，該方法簡單快速，成本低廉。由于弗羅里硅土對黃曲霉的吸附能力強，因此用弗羅里硅土柱凈化洗脫需要用到大量的丙酮-水溶液[6-8]；Sobolev[9]對于弗羅里硅土柱（130 mg/1.5 mL）凈化的的洗脫條件進行了研究，結果顯示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)為洗脫溶劑時的洗脫能力*強，2 mL的洗脫體積即可得到大于98%的回收率；該凈化方法用于花生、巴西堅果、玉米、棉籽等樣品基質，其中花生基質中B1定量限達到0.05 μg/kg；使用商品化的弗羅里硅土柱[10]可以保證樣品檢測的重復性，同時可進行實驗室間結果比對。

2 熒光檢測法

熒光檢測器在黃曲霉毒素檢測中的應用較早，技術較為成熟。黃曲霉毒素共有的香豆素結構使熒光檢測法成為首要檢測方法，黃曲霉毒素在波長360nm的激發光下能發射出波長420nm的熒光。由于B1和G1分子的二呋喃結構中碳碳雙鍵的吸電子誘導效應，致使分子熒光強度減弱，影響了方法的靈敏度和檢出限。通過對雙鍵衍生變成飽和碳碳單鍵可增強B1和G1的熒光強度，通常采用的衍生法有柱前三氟乙酸衍生、柱后碘衍生、柱后溴衍生和柱后光化學衍生，這四種衍生方法目前均被AOAC官方方法采用。柱前三氟乙酸衍生時需要在前處理部分增加衍生步驟，增加了前處理的時間以及結果的不確定度，同時B1、G1的衍生產物B2a、G2a存在穩定性的問題。碘衍生法是飽和碘溶液和B1、G1在60～75 ℃下發生衍生反應，由于衍生池增加了柱后死體積，易造成色譜峰變寬，且每次都要配制新鮮的溶液。

溴比碘的氧化性更強，反應效率更高，但由于溴本身不穩定，不宜直接作為衍生試劑使用，衍生時采用以下兩種方式，一種是在柱后衍生泵中加入三溴化吡啶鎓（PBPB），室溫下與B1、G1發生反應；另一種是在流動相中加入溴化鉀和硝酸，利用Kobra cell儀電化學在線產生的溴進行柱后衍生。光化學衍生（PHRED）是將反應線圈繞在紫外燈外，當流動相進過反應線圈時，B1、G1被衍生成熒光較強的B2a、G2a，類似于B1、G1和三氟乙酸的反應。Walking[37]將光化學衍生和Kobra cell電化學衍生法、碘衍生法進行了比較，在花生中光化學衍生具有和后兩者相當的效果，但在玉米中偏差較大。

除化學衍生外，環糊精也可以增強黃曲霉毒素B1、G1和M1的熒光強度，不過環糊精和黃曲霉毒素間的作用機制尚無定論。熒光檢測法需要在提取階段進行比較才徹底的凈化，任何殘留的熒光性雜質都可能造成對陽性的誤判，報出假陽性的結果。熒光檢測法必須確保目標物的完全分離，當其他真菌毒素和黃曲霉毒素同時檢測時，就對分離提出了更高的要求。