菌種對(duì)鞋類(lèi)襯里和內(nèi)墊抗菌檢測(cè)結(jié)果的影響
作者：百檢網(wǎng) 時(shí)間：2021-11-22 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)
? ? 摘要：本
? ??隨著生活水平的提高，人們對(duì)健康和衛(wèi)生的要求越來(lái)越高，鞋子內(nèi)部的高溫、潮濕
? ??抗菌是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、阻止細(xì)菌繁殖的一種控制措施，使機(jī)體不受微生物活動(dòng)的危害、防止物品因微生物生長(zhǎng)活動(dòng)而腐敗變質(zhì)或成為傳播微生物危害的媒體。針對(duì)目前抗菌材料在制鞋行業(yè)廣泛應(yīng)用而專(zhuān)門(mén)制定了關(guān)于鞋類(lèi)襯里和內(nèi)墊材料抵抗某種菌類(lèi)的技術(shù)條件的標(biāo)準(zhǔn)，此標(biāo)準(zhǔn)采用了衛(wèi)生部通用的菌液吸收法和膜接觸法。本文主要通過(guò)菌液吸收法試驗(yàn)，研究了菌種不同代數(shù)對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及白色念珠菌抗菌效果檢測(cè)的影響。
1.試驗(yàn)設(shè)備與材料
1.1試驗(yàn)設(shè)備
壓力蒸汽滅菌器；恒溫培養(yǎng)箱；冰箱；超凈工作臺(tái)；電子天平，精確度± 0.01 g；三角燒瓶；試管；移液管；酒精燈；接種環(huán)；培養(yǎng)皿。
1.2試劑和培養(yǎng)基
營(yíng)養(yǎng)肉湯：蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、蒸餾水1000mL， pH為7.0～7.2；
營(yíng)養(yǎng)瓊脂：蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL，pH為7.0～7.2；
平板計(jì)數(shù)瓊脂：胰蛋白胨5.0g、酵母粉2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL，pH為7.0～7.2；
洗脫液：含0.85％NaCl的生理鹽水，pH為7.0～7.2；
磷酸鹽緩沖液（PBS）：磷酸氫二鈉 2.83g、磷酸二氫鉀 1.36g、蒸餾水1000mL，pH為7.0～7.2。
1.3檢驗(yàn)菌種
大腸桿菌 ATCC 25922、大腸桿菌8099、大腸桿菌CMCC 44825、金黃色葡萄球菌ATCC 6538、金黃色葡萄球菌CMCC 26003 、金黃色葡萄球菌CMCC 26071、白色念珠菌ATCC 10231。
2.試驗(yàn)方法
2.1菌種活化
將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在（37±1）℃培養(yǎng)24h后，在5℃~10℃下保藏（不得超過(guò)一個(gè)月），作為斜面保藏菌。將斜面保藏菌轉(zhuǎn)接到平板營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在（37±1）℃培養(yǎng)（24±1）h，每天轉(zhuǎn)接1次，不超過(guò)2周。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用2代~8代的24h內(nèi)轉(zhuǎn)接的新鮮細(xì)菌培養(yǎng)物。
2.2菌懸液的制備
用接種環(huán)從2.1新鮮培養(yǎng)物上刮1環(huán)新鮮細(xì)菌，加入培養(yǎng)液中，并依次做10倍梯度稀釋至所需要的濃度（約2.5×105cfu/mL~1×106cfu/mL）。
2.3試驗(yàn)步驟
2.3.1 樣品接種
將樣品分別放于滅菌的培養(yǎng)皿中，然后準(zhǔn)確移取（1.0±0.1）mL的菌液均勻接種到樣品上。將這些樣品在無(wú)菌狀態(tài)下轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，蓋緊瓶蓋以防蒸發(fā)。
2.3.2 “0”接觸時(shí)間的對(duì)照樣、未接種試樣的洗脫
接種后盡快向?qū)φ諛印⑽唇臃N試樣中加入（100±1）mL洗脫液，充分振蕩1min，參考GB 4789.2-2010進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
2.3.3 樣品接種后的培養(yǎng)、洗脫
將接種后的三組對(duì)照樣和三組抗菌樣在（37±1）℃條件下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)結(jié)束后，在對(duì)照樣和抗菌樣的瓶中加入（100±1）mL洗脫液，振蕩洗脫1min后，參考GB 4789.2-2010進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
2.4結(jié)果計(jì)算及評(píng)定
2.4.1細(xì)菌數(shù)記錄
如經(jīng)100稀釋度培養(yǎng)得到的活菌數(shù)為0，則記為＜100.
2.4.2抗菌率計(jì)算
抗菌率的計(jì)算依據(jù)QB/T 2881-2007鞋類(lèi)襯里和內(nèi)墊材料抗菌技術(shù)條件
??????????? R=(A-B) /A×100
R：抗菌率，％；A：經(jīng)24h培養(yǎng)的三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)空白樣的活菌數(shù)的平均值；
B：經(jīng)24h培養(yǎng)的三個(gè)抗菌樣品的活菌數(shù)的平均值。
3.結(jié)果與
3.1菌種不同代數(shù)對(duì)抗菌效果的影響
分別采用第2、3、4、5代的金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌ATCC 25922、白色念珠菌ATCC10231進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 菌種不同代數(shù)對(duì)抗菌效果的影響
菌種 代數(shù) | 金黃色葡萄球菌 | 大腸桿菌 | 白色念珠菌 | ||||||
A | B | R | A | B | R | A | B | R | |
2 | 1.23×105 | 1.71×104 | 86.10 | 1.84×104 | 2.42×103 | 86.85 | 1.85×104 | 4.47×103 | 75.84 |
3 | 2.63×105 | 1.75×104 | 93.35 | 2.37×105 | 1.87×104 | 92.11 | 2.48×105 | 2.08×104 | 91.61 |
4 | 2.36×105 | 1.07×104 | 95.47 | 2.62×105 | 1.85×104 | 92.94 | 2.80×105 | 1.90×104 | 93.21 |
5 | 1.24×105 | 9.56×103 | 92.29 | 1.83×105 | 1.49×104 | 91.86 | 2.37×105 | 2.12×104 | 91.05 |
6 | 2.41×105 | 1.75×104 | 92.74 | 1.73×105 | 1.65×104 | 90.46 | 2.55×105 | 2.44×104 | 90.43 |
7 | 1.78×105 | 1.51×104 | 91.52 | 2.47×105 | 2.34×104 | 90.53 | 1.93×104 | 2.23×103 | 88.45 |
8 | 1.71×105 | 1.57×104 | 90.82 | 1.95×104 | 2.23×103 | 88.56 | 2.60×105 | 2.64×104 | 90.67 |
由表1可以看出，在菌液吸收法抗菌檢測(cè)中，采用第3、4、5、6代的菌種制作菌懸液進(jìn)行試驗(yàn)，作用24h后，樣品對(duì)大腸桿菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌的抗菌率均在90%以上；采用第2代的菌種制作菌懸液進(jìn)行試驗(yàn)，作用24h后，樣品對(duì)大腸桿菌、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌的抗菌率均在90%以下，且對(duì)白色念珠菌的抗菌率*小；采用第7、8代的菌種制作菌懸液進(jìn)行試驗(yàn)，作用24h后，樣品對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌率均在90%以上，樣品對(duì)大腸桿菌、白色念珠菌的抗菌率低于90%。若試驗(yàn)菌的活性低，同樣的試驗(yàn)方法測(cè)出的抗菌率往往偏低難于得出正確的數(shù)據(jù)，特別是接種液不新鮮時(shí)表現(xiàn)尤為明顯。菌種經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期人工培養(yǎng)或保藏，由于自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳В⑶椅⑸镌趥鞔^(guò)程中也易發(fā)生變異甚至死亡，因此我們要對(duì)菌種進(jìn)行復(fù)壯，且傳代次數(shù)不能過(guò)多，建議采用3～5代的新鮮培養(yǎng)物。
3.2菌種不同來(lái)源對(duì)抗菌效果的影響
分別采用金黃色葡萄球菌的三個(gè)不同來(lái)源的第三代菌株：ATCC 6538 、CMCC 26003 、CMCC 26071；大腸桿菌的三個(gè)不同來(lái)源的第三代菌株：ATCC 25922、8099 、CMCC44825進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 ?菌種不同來(lái)源對(duì)抗菌效果的影響
試驗(yàn) 次數(shù) | 金黃色葡萄球菌 | 大腸桿菌 | ||||||
菌種編號(hào) | A | B | R | 菌種編號(hào) | A | B | R | |
1 | ATCC 6538 | 8.97×104 | 7.13×103 | 92.05 | ATCC 25922 | 1.83×105 | 1.48×104 | 91.91 |
CMCC 26003 | 1.35×105 | 1.07×104 | 92.07 | 8099 | 2.40×105 | 2.24×104 | 90.67 | |
CMCC 26071 | 2.57×105 | 1.75×104 | 93.19 | CMCC 44825 | 2.47×105 | 2.34×104 | 90.53 | |
2 | ATCC 6538 | 2.74×105 | 1.78×104 | 93.50 | ATCC 25922 | 1.71×105 | 1.57×104 | 90.82 |
CMCC 26003 | 2.63×105 | 1.75×104 | 93.34 | 8099 | 2.58×105 | 1.72×104 | 93.33 | |
CMCC 26071 | 2.57×105 | 1.75×104 | 93.19 | CMCC 44825 | 1.78×105 | 1.51×104 | 91.52 | |
3 | ATCC 6538 | 2.37×105 | 1.20×104 | 91.56 | ATCC 25922 | 2.41×105 | 2.30×104 | 90.46 |
CMCC 26003 | 2.28×105 | 1.27×104 | 94.42 | 8099 | 1.70×105 | 1.48×104 | 91.29 | |
CMCC 26071 | 1.75×105 | 1.17×104 | 93.31 | CMCC 44825 | 2.40×105 | 2.25×104 | 90.63 | |
由表1可以看出，在菌液吸收法抗菌檢測(cè)中，樣品對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC 6538 、CMCC 26003 、CMCC 26071抗菌率均大于90%，相對(duì)差值小于0.02%；樣品對(duì)大腸桿菌ATCC 25922、8099 、CMCC44825的抗菌率也均大于90%，相對(duì)差值小于0.02%。
5.結(jié)論
本試驗(yàn)依據(jù)QB/T 2881-2007鞋類(lèi)襯里和內(nèi)墊材料抗菌技術(shù)條件附錄A菌液吸收法，對(duì)影響抗菌效果檢測(cè)的關(guān)鍵因素菌種進(jìn)行了研究。在標(biāo)準(zhǔn)QB/T 2881-2007中，已經(jīng)對(duì)檢測(cè)的相關(guān)因素做了具體要求，本文僅對(duì)菌種的傳代次數(shù)及不同來(lái)源進(jìn)行比較研究。
菌種是從事抗菌檢測(cè)研究的基本材料，菌種作為一種特殊的標(biāo)準(zhǔn)品，其使用、保存與管理是微生物檢測(cè)的一項(xiàng)重要工作，微生物具有生命活力，在傳代過(guò)程中易發(fā)生變異甚至死亡，因此盡量避免不必要的移種和傳代，將必要的傳代降低到*低限度，以減少自發(fā)突變的機(jī)率。
在制作菌懸液時(shí)，建議采用3～5代的新鮮培養(yǎng)物，若無(wú)ATCC菌株，也可以用CMCC菌株來(lái)替代進(jìn)行試驗(yàn)。
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作者簡(jiǎn)介：石笛，女，微生物學(xué)碩士，**工程師，質(zhì)量室主任，主要從事菌種鑒定、抗菌防霉檢測(cè)等方面的研究。
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關(guān)鍵詞：鞋類(lèi)襯里和內(nèi)墊；抗菌檢測(cè)；菌種