丁年平 楊冠東 張增峰 黃春喜 鄭飛龍 楊永強

?（廣州工業微生物檢測中心 廣州? 510663）

? ? 摘要：本實驗對冰箱抗菌防霉檢測方法進行了研究。結果表明，在冰箱殺菌檢測，由于冰箱低溫低濕的環境，以常規的玻片為載體時，對照冰箱中大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌的自然消亡率高，作用24h達到99.9%，而以瓊脂片為載體，由于瓊脂片本身具有一定的水分，自然消亡率較低，瓊脂片是冰箱殺菌檢測中一種較合適的染菌載體；防霉檢測中，除了需要對試驗空間進行噴霧加濕，還應該定期對培養基表面加濕，才能保證培養基和霉菌所需的水分，對照冰箱中霉菌正常生長。

1.前言

? ? 家用電器的抗菌、除菌、凈化等衛生功能作為一項附加功能，雖出現時間不長，但已為消費者所了解，并受到青睞[1]?，F有的冰箱除菌標準，主要是關于冰箱部件及材料的抗菌防霉檢測方法，而對于利用臭氧、紫外、負離子的殺菌冰箱的抗菌防霉檢測方法研究較少，也沒有相應的標準，目前對于這方面的檢測主要依據《消毒技術規范》衛生部2002年版-2.1.5滅菌與消毒器械消毒功效鑒定試驗[2]。但由于冰箱特殊的低溫低濕環境，依照此方法進行檢測時，若作用時間較短，對殺菌效果影響較小[3]，但作用時間較長時，主要出現了如下問題：若以傳統染菌載體，玻片、濾紙片、棉布等，部分檢測菌種的自然消亡率較高，殺菌率結果計算存在差異或難以計算；防霉檢測中，培養基容易失水，對照冰箱霉菌不生長等。

? ? 本文通過試驗，研究了以玻片及瓊脂片為載體，臭氧殺菌冰箱對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、白色葡萄球菌的殺菌效果檢測的影響；防霉檢測中，對冰箱試驗空間以及培養基表面進行噴霧加濕對試驗結果的影響。

2.試驗設備與材料

2.1試驗設備

壓力蒸汽滅菌器；恒溫培養箱；天平，精確度± 0.01 g；三角燒瓶，配蓋；移液管；酒精燈；接種環；培養皿；冰箱； O₃測定儀。

2.2試劑、 培養基、緩沖液

營養瓊脂、磷酸鹽緩沖液（PBS）、YPD、PDA、改良察氏液體培養基（北京陸橋有限公司）

2.3菌種

抗菌檢測：大腸桿菌 ATCC 25922、金黃色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌ATCC 10231、綠膿桿菌ATCC15442、白色葡萄球菌8032

防霉檢測：黑曲霉AS3.4463、繩狀青霉AS33875、球毛殼霉AS34254、出芽短梗霉AS33984、土曲霉 AS33935、宛氏擬青霉 AS3.4253

3.試驗方法

3.1抗菌檢測方法的研究

3.1.1臭氧濃度檢測

打開冰箱及臭氧發生器，將冰箱冷藏室溫度設定在4℃。**后，冰箱冷藏室達到4℃，檢測臭氧濃度。

3.1.2 菌種活化

?將標準菌株接種于營養瓊脂斜面上，在（37±1）℃培養24h后，在5℃~10℃下保藏（不得超過一個月），作為斜面保藏菌。將斜面保藏菌轉接到平板營養瓊脂培養基，在（37±1）℃培養（24±1）h，每天轉接1次，不超過2周。試驗時應采用3代~14代，24h內轉接的新鮮細菌培養物。

3.1.2 菌液的制備

用接種環從3.1.2新鮮培養物上刮1環新鮮細菌，加入培養液中，并依次做10倍梯度稀釋至所需要的濃度（約1×10⁸cfu/mL~5×10⁸cfu/mL）。取菌液10ul滴加到載體（10mm×10mm，玻璃片、瓊脂片）上，將染菌載片置于37℃溫箱內干燥30min后再放置在平板中（每塊菌片的回收菌數，按活菌培養計數所得結果，應為5×10⁵cfu/片~5×10⁶cfu/片），備用。

3.1.3在以下三種條件下進行試驗，試驗重復三次，每次三個平行，取平均值做檢測結果：①在室溫條件下（30℃培養箱），不接臭氧發生器(A)；②冰箱冷藏室在4℃條件下，不接臭氧發生器（B）；③冰箱冷藏室在4℃條件下，接臭氧發生器，臭氧濃度設定為0.05ppm（C）。

3.1.4將染菌載片放置于3.1.3三種條件下，檢測經過4h，12h，24h后，載片上菌落數的變化。

3.2防霉檢測方法的研究

3.2.1 菌種活化

將保藏菌接種在PDA斜面培養基試管中，培養7d~14d，使生成大量孢子。未制備孢子懸液時，不得拔去棉塞,每打開1支只供制備1次懸液,每次制備孢子懸液必須使用新培養的霉菌孢子。

3.2.2 將孢子懸液噴灑在改良察氏培養基表面，將其放置在3.1.3三種條件下，觀察不加濕、試驗空間噴霧加濕的情況下，培養基情況及霉菌生長情況。

3.3結果計算及評定

3.3.1殺菌率計算

殺菌率的計算依據《消毒技術規范》衛生部2002年版-2.1.5滅菌與消毒器械消毒功效鑒定試驗。

自然消亡率=[(A-B)/A]×****；殺菌率=[ (B-C)/B]×****；

3.3.2防霉結果評定^[4]

GB 21551.4-2010家用和類似用途電器的抗菌、除菌、凈化功能 電冰箱的特殊要求標準規定，對照樣品長霉面積應不小于10%，否則不能作為該試驗的對照樣品。

4.結果與分析

4.1冰箱抗菌檢測方法的研究

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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? （a）大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（b）金黃色葡萄球菌

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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（c）白色念珠菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? （d）綠膿桿菌

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（e）白色葡萄球菌

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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? （f）自然消亡率 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?（g）殺菌率

圖1 不同載片對冰箱殺菌檢測方法的影響(A:常溫對照，B:對照冰箱，C:殺菌冰箱，自然消亡率=[(A-B)/A]×****，殺菌率=[ (B-C)/B]×****)

由圖1(a)- (g)可才看出，在冰箱殺菌檢測中，以常規的玻片為載體，作用4h時，對照冰箱中的大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌自然消亡率均達到70%以上，12h時，自然消亡率達到99%左右，24h時，自然消亡率達到99.9%；而金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌的自然消亡率較小。以瓊脂片為載體時，對照冰箱中大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、白色葡萄球菌的自然消亡率均比較小，作用24h后，消亡率均在50%以下。這是因為，冰箱內部是一個低溫低濕的環境，以玻片為載體時，大部分微生物由于缺水，自然消亡率高，而部分微生物，如金黃色葡萄球菌對低溫低濕的耐受性較強，在干燥環境中，依然可以存活數周，自然消亡率就比較低；以瓊脂片為載體時，雖然冰箱內部環境濕度較低，但是瓊脂片本身具有一定的水分，為微生物存活提供了需要的水分，自然消亡率就比較低。

在冰箱殺菌檢測中，若對照冰箱的自然消亡率較高，對*后殺菌率D的計算有很大的影響。如以玻片為載體時，大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌12h的殺菌率小于4h 的殺菌率，而24h的殺菌率由于對照冰箱的消亡率太高而無法計算。因此，冰箱殺菌檢測中，選擇合適的載體尤為重要。試驗結果說明，瓊脂片是冰箱殺菌檢測中一種較合適的染菌載體。

4.2冰箱防霉檢測方法的研究

表1冰箱防霉檢測中不同條件下培養基及霉菌生長情況

冰箱濕度一般是40%-70%^[5]，而在運行時，如沒有加濕裝置，一般只能達到40%左右。由表1可以看出，冰箱防霉中，若不加濕，培養基從試驗第二天開始便會失水變薄，對照冰箱和殺菌冰箱中的霉菌均不生長。而依據相關標準，對照樣品長霉面積應不小于10%，否則不能作為該試驗的對照樣品。如果對冰箱試驗空間進行噴霧加濕，培養基能較好保持水分，對照冰箱中的霉菌亦能正常生長。但是試驗中亦發現，由于冰箱的制冷功能，制冷后，冰箱內的部分水分變成了冰，冰箱不斷制冷，雖然進行噴霧加濕，但是濕度保持亦比較難，因此，試驗時，除了需要對試驗空間進行噴霧加濕，還應該定期對培養基表面加濕。

5.結論

試驗表明，由于冰箱的制冷功效，冰箱內部為一個低溫低濕的環境，在冰箱的殺菌檢測中，若以玻片為載體，對照冰箱中大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌的自然消亡率高，作用24h達到99.9%，殺菌率結果差異較大或無法計算，而以瓊脂片為載體，由于瓊脂片本身具有一定的水分，自然消亡率較低，對殺菌率的計算無影響，因此，瓊脂片是冰箱殺菌檢測中一種較合適的染菌載體。在防霉檢測中，除了需要對試驗空間進行噴霧加濕，還應該定期對培養基表面加濕，才能保證培養基和霉菌所需的水分，對照冰箱中霉菌正常生長。

在冰箱的實際使用過程中，一般用來保藏果蔬等食品，因此，建議在檢測冰箱殺菌性能的時候，除了用特定的染菌載體，也可以考慮用果蔬等實物表面做載體進行檢測，這樣更具有代表性。

參考文獻

[1]李畢忠，李澤國.家用電器的抗菌除菌凈化功能標準對抗菌劑企業發展的影響[J].新材料產業2010,1:43-45

[2]衛生部衛生法制與監督司. 消毒技術規范[ S ]. 北京: 中華人民共和國衛生部, 2002: 20 - 23.

[3]丁年平,黃春喜,周卓為等. 臭氧發生器應用于冰箱的殺菌效果研究[J].家電科技2012,7

[4]GB 21551.4-2010家用和類似用途電器的抗菌、除菌、凈化功能 電冰箱的特殊要求

[5]焦巖,張巖,李保國等.濕濕度變化對冰箱中果蔬貯藏質量影響的研究[J].低溫與特氣，2001，19（6）:18-21

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關鍵詞：冰箱；抗菌家電；臭氧；殺菌；抗菌防霉檢測