嬰幼兒食品乳品中葉酸怎么檢測?目前對于嬰幼兒食品乳品中葉酸有對應(yīng)的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。今天百檢網(wǎng)就給大家介紹一下嬰幼兒食品乳品中葉酸的測定方法相關(guān)信息。

檢測方法標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：GB 5413.16-2010 嬰幼兒食品和乳品中葉酸

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)的測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中葉酸(葉酸鹽活性)的測定。

2.規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.原理

利用干酪乳桿菌( Lactobacillus casei)ATCC 7469對葉酸的特異性,在含有葉酸的樣品中生長產(chǎn)生的酸度和形成的光密度來測定葉酸的含量。

4.試劑和材料

除非另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。

4.1 雞胰腺:稱取100mg干燥的雞胰腺,加20mL蒸餾水,攪拌15min,離心10min(3000轉(zhuǎn)分鐘),取上清液,臨用前配制。

4.2 0.9%生理鹽水:稱取9.0g氯化鈉溶解于100mn水中,分裝于具塞試管中,每管10mL,121℃滅菌15min。每周準(zhǔn)備一次。

4.3 磷酸鹽緩沖液

4.3.1 磷酸鹽緩沖液Ⅰ(0.05mol/L):稱取5.85g磷酸二氫鉀,1.22g磷酸氫二鉀,用1000mnL水溶解。臨用前按0.5g/100mL加入抗壞血酸。

4.3.2 磷酸鹽緩沖液Ⅱ(用于谷物及谷物制品前處理):稱取14.2g磷酸氫二鈉,用1000mL水溶解。臨用前按1.0g/100mL加入抗壞血酸,用氫氧化鈉溶液A(4.16)調(diào)pH至7.8±0.1。

4.3.3 磷酸鹽緩沖液Ⅲ(用于谷物及谷物制品測試):稱取14.2g磷酸氫二鈉,用1000mnL水溶解。臨用前按1.0g/100mL加入抗壞血酸,用氫氧化鈉溶液A(4.16)調(diào)pH至6.8±0.1。

4.3.4 磷酸鹽緩沖液Ⅳ(0.1 mol/L)(用于谷物及谷物制品標(biāo)準(zhǔn)溶液制備):溶解13.61g磷酸二氫鉀于水中稀釋到1000mL。用氫氧化鉀溶液(4.10)調(diào)pH至7.0±0.1。

4.4 葉酸標(biāo)準(zhǔn)品。

4.5 氨水(10.8%)

4.6 甲苯(C7H8)。

4.7 抗壞血酸(C6H8O6)。

4.8 菌株:干酪乳桿菌( Lactobacillus casei)ATCC 7469。

4.9 培養(yǎng)基

4.9.1 乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基:胨化乳15g,酵母浸膏5g,葡萄糖10g,番茄汁100mL,磷酸二氫鉀2g,聚山梨糖單油酸酯1g,瓊脂10g,加蒸餾水至1000mL,調(diào)pH至68±0.2(20℃～25℃)。121℃高壓滅菌15min,備用。

4.9.2 乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基:胨化乳15g,酵母浸膏5g,葡萄糖10g,番茄汁100mL,磷酸二氫鉀2g,聚山梨糖單油酸酯1g,加蒸餾水至1000mnL,調(diào)pH至68±02(20℃～25℃)。121℃高壓滅菌15min,備用。

4.9.3 葉酸測定用培養(yǎng)基:酪蛋白胨10g,葡萄糖40g,乙酸鈉40g,磷酸氫二鉀1g,磷酸二氫鉀1g,DL-色氨酸0.2g,L-天門冬氨酸0.6g,L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g,硫酸腺嘌呤10mg,鹽酸鳥嘌呤10mg,尿嘧啶10mg,黃嘌呤20mg,聚山梨糖0.1g,谷光甘肽5mg,硫酸鎂0.4g,氯化鈉20mg,硫酸亞鐵20mg,硫酸錳15mg,核黃1mg,p-氨基苯甲酸2mg,維生素B6 4mg,鹽酸硫胺素400μg,泛酸鈣800μg,煙酸800μg,生物素20μg,加蒸餾水至1000mnL,調(diào)pH至6.7±0.1(20℃～25℃)。

注:市售商業(yè)化合成培養(yǎng)基效果更穩(wěn)定。

4.10 氫氧化鉀溶液(4mol/L):稱取224g氫氧化鉀于1000mL燒杯中,用400mL水溶解,冷卻至室溫后,轉(zhuǎn)移至1000mnL容量瓶中,用水定容。

4.11 木瓜蛋白酶溶液:1g蛋白酶(活力≥6000U/mg,pH6.0±0.1,40℃)溶于100mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ(4.3.1)中。臨用前配制。

4.12 α-淀粉酶溶液:1gα-淀粉酶(1.5U/mg)溶于l00mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ(4.3.1)中。臨用前配制。

4.13 0.22μm滅菌濾膜。

4.14 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

4.14.1 葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液(500μg/mL):稱取55mg～56mg(精確至0.lmg)葉酸標(biāo)準(zhǔn)品(4.4),用50mL蒸餾水轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,加2mL氨水(4.5)。溶液制備后,按式(1)計算溶液的體積,要求貯備液中葉酸鹽的濃度為500μg/mL:

用水稀釋溶液至刻度,用吸管加水至計算要求的體積,充分混合,放入棕色試劑瓶中2℃～4℃冰箱冷藏,保存期為4個月。

4.14.2 葉酸標(biāo)準(zhǔn)中間液(50μg/mL):吸取10mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4.14.1)于100mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,充分混勻,2℃～4℃冰箱冷藏,保存期為1個月。

4.14.3 葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.05ng/mL,0.1ng/mL):吸取1mL葉酸標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.14.2)于100mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,混合。再吸該液1mL于100mL棕色容量瓶中,定容,混合。從上液中分別吸取5mL于250mL和500mL棕色容量瓶中,用磷酸鹽緩沖液Ⅰ(4.3.1)定容到刻度,混勻,即為高濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.1ng/mL)和低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.05ng/mL)。臨用前配制。

4.15 鹽酸(1mol/L):量取83.0mL鹽酸溶于水中,冷卻后定容至1000mnL。

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