五靈脂（FaecesTrogopterori）是哺乳綱鼯鼠科動物復齒鼯鼠（TrogopterusxanthipesMilne-Edwards）的干燥糞便，分為靈脂米和靈脂塊兩種。靈脂米即復齒鼯鼠的干燥糞便，靈脂塊是其糞便與尿液的混合物夾以少量砂石干燥凝結而成［1］。五靈脂具有行血散瘀止痛的功效，用于治療產后子宮復舊不全、毒蛇咬傷、胃脘痛經久不愈等［2］。原兒茶酸（3，4-二羥苯甲酸Protocatechunicacid）具有增加冠脈血流、緩解心絞痛的作用，是五靈脂的重要活性成分單體之一，是一種水溶性酚酸成分，具有顯著降低心肌耗氧量、提高心肌耐氧能力、減慢心率等藥理作用，并且對乙肝病毒的脫氧核糖核酸（DNA）復制具有較強的抑制作用［3］。目前五靈脂中原兒茶酸的測定方法主要是液相色譜法［4–5］和分光度法［6］；樣品前處理主要使用超聲提取和水浴加熱提取兩種方式，缺點是耗時長，試劑用量大、揮發多。筆者采用加速溶劑萃取法（ASE），具有萃取時間短、溶劑用量少和萃取效率高等突出優點。該法的研究將為控制五靈脂藥材的質量提供參考。

1實驗部分

1.1主要儀器與試劑

液相色譜儀：Waters2695型，配有紫外檢測器，美國沃特斯公司；渦旋儀：MS3型，德國IKA公司；超聲儀；SK8200LH型，上?？茖С晝x器有限公司；高純水發生器：Milli-QⅡ型，美國密理博公司；離心機：T–124型，瑞士KONTRON公司；旋轉蒸發儀：RE–52AA型，上海亞榮生化儀器廠；加速溶劑萃取儀（ASE）：ASE200型，美國戴安公司；原兒茶酸標準品：東京化學工業公司；甲醇、乙腈：色譜純，美國Fisher公司；再生纖維素濾膜：0.2μm，美國安捷倫公司；五靈脂樣品：市售和蒙古國進口樣品；其它試劑均為優級純；實驗用水為二次凈化水。

1.2溶液配制

1.2.1標準溶液

準確稱取適量原兒茶酸標準品，用甲醇配成100mg／L的標準儲備液，儲存于–18℃冰箱，保存期18個月。根據實驗需要，用甲醇稀釋標準儲備液，配成適當濃度的標準工作溶液。
1.2.2樣品提取液

750mL無水乙醇和250mL水混合。

1.3液相色譜條件

液相色譜柱：DiamosilC18（4.6mm×250mm，5.0μm，迪馬科技公司）；流動相：甲醇（A）和0.5%的乙酸水溶液（B）；梯度洗脫程序：0～10min時85%～60%的A，10～15min時60%～15%的A，15～22min時15%的A，22～25min時15%～85%的A，25～30min時85%的Ａ；流速：1.0mL／min；

柱溫：35℃；分析波長：260nm。
1.4樣品處理

稱取1.0g樣品，添加0.2g硅藻土，混勻后置于11mL加速溶劑萃取池中（下部預先添加少量海沙），上部添加海沙至平，擰緊萃取池冒，放入加速溶劑萃取池盤中。ASE條件：溶劑為乙醇–水（體積比75∶25），溫度為100℃，壓力為15MPa，預熱時間為5.0min，靜態萃取時間為10.0min，循環次數為3次。接收池溶液旋轉蒸發至約5mL，用提取液定容至5.0mL，過0.2μm的再生纖維素膜，上液相色譜測定。

1.5色譜圖

在1.3的色譜條件下，原兒茶酸標準品的色譜圖見圖1。

2結果與討論

2.1色譜柱和流動相的選擇

原兒茶酸為白色至褐色結晶性粉末，在空氣中變色。其結構為苯環上含有兩個羥基和一個羧基。原兒茶酸的屬于*性稍強物質，在反相色譜柱上有保留。參考待測物的性質和相關文獻［7］，選擇反相C18色譜柱分離待測物。通過比較甲醇和酸性（乙酸和磷酸）水溶液，乙腈和酸性（乙酸和磷酸）水溶液，依據基線噪音的高低和目標物與雜質的分離度進行選擇。實驗結果表明，甲醇和0.5%乙酸的水溶液作為流動相，噪音較低，分離度較好。

2.2提取條件的選擇

原兒茶酸常用的提取液有乙醇水溶液和甲醇水溶液。由于甲醇毒性較大，因此選擇乙醇和水的溶液提取。加速溶劑萃取技術是近年來發展起來的一種在高溫（室溫～200℃）、高壓（0.1～20MPa）條件下快速提取固體或半固體樣品的樣品前處理方法，與常用的索氏提取、超聲提取、微波萃取技術等方法相比具有節省溶劑、快速、健康環保、自動化程度高等優點。該技術廣泛應用環境分析、農產品安全、制藥、天然產物提取和能源等諸多領域，適合色譜分析樣品預處理。

筆者依據待測物質和提取溶劑的性質選擇性試驗了加速溶劑提取的溫度、壓力、提取時間和循環次數等條件，并參照色譜上的保留行為和其含量變化選擇條件，實驗*終確定的提取條件：溫度100℃，壓力15MPa，預熱5min，靜態提取10min，循環次數為3次。

2.3工作曲線方程、檢出限及定量限

用原兒茶酸的標準儲備液配制不同濃度的標準工作溶液，原兒茶酸的標準工作溶液的濃度分別為0.1，0.3，0.5，1.0，5.0，10.0mg／L。在1.3色譜條件下分別進行測定，以色譜峰面積(Y)為縱坐標，以原兒茶酸的質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y=0.045X＋0.029，相關系數r=0.9998，線性范圍為0.1～10.0mg／L。以3倍信噪比計算得檢出限為0.5mg／kg，以10倍信噪比計算定量限為1.0mg／kg。

2.4回收率和精密度試驗

利用五靈脂樣品進行3個添加水平的回收試驗，每個水平重復5次。原兒茶酸的添加量是1.0，2.0，5.0mg／kg3個水平，回收率和精密度的試驗結果見表1。由表1可知，該方法有較好的精密度和準確度，可以滿足五靈脂中原兒茶酸含量檢測需要。

2.5樣品測定

將本方法用于實驗室中25份五靈脂樣品的分析，對樣品中的原兒茶酸含量進行測定，*終定容體積依據其含量水平稀釋到線性范圍內，根據化合物的色譜保留時間和光譜圖來鑒別樣品。所測定樣品中原兒茶酸的含量水平為0.01%～0.1%范圍內。