羅丹明B又稱玫瑰紅B、蕊香紅B、玫瑰精B和若丹明B，是一種具有鮮桃紅色的人工合成堿性熒光染料，主要用于打字紙、有光紙等造紙工業，油漆、圖畫等顏料制造，也可用于腈綸、麻、蠶絲等織物以及麥稈、皮革制品的染色。羅丹明B進入人體后易導致人體皮下組織增生肉瘤，具有致癌和致突變性［1－3］。

我國于2008年明確規定不允許將羅丹明B用作食品添加劑及食品染色［4］，歐盟等國家不允許在食品中使用羅丹明B。但由于羅丹明B價格低廉、著色穩定、色澤鮮艷等特點，將其添加到食品中的非法事件仍時有發生，嚴重危害人們的飲食安全。羅丹明B的檢測方法有固相萃取–高效液相色譜法［5］、液相質譜聯用法［6–7］，及2010年國家質量監督檢驗檢疫總局發布的行業標準SN／T2430–2010［8］。

以上方法樣品處理過程復雜，難以滿足日常快速、簡便的檢測要求，不易推廣應用。筆者以干紅辣椒為研究對象，采用甲醇水溶液（體積80∶20）超聲提取辣椒中的羅丹明B，稀釋、離心、過0.22μm濾膜過濾后，進行液相色譜（熒光檢測器）測定，對羅丹明B進行了定性和定量分析。該方法樣品前處理簡單、羅丹明B的色譜峰形好、分離度高、線性范圍寬，定量結果具有很好的重現性、精密度，羅丹明B回收率高，可以滿足辣椒樣品分析要求。

1實驗部分

1．1主要儀器與試劑

液相色譜儀：L–2000型，配熒光檢測器（FLD），日本日立高新技術公司；旋渦混勻器：XW–80A型，上海精科實業有限公司；高速離心機：TG16–WS型，湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司；

超聲波儀：SK1200H型，上海科導超聲儀器有限公司；甲醇：色譜純；羅丹明B標準樣品：純度不低于98%；羅丹明B標準儲備溶液：200μg／mL，準確稱取適量羅丹明B標準樣品，用甲醇水溶液（體積比80∶20）溶解完全并稀釋定容。

1．2色譜條件

色譜柱：LaChromC18柱（250mm×4.6mm）；柱溫：35℃；流動相：甲醇–水溶液（體積比70∶30）；流速：1.0mL／min；熒光檢測器：激發波長550nm，發射波長580nm；進樣量：20μL。

1．3樣品處理

準確稱取2.000g粉碎處理好的辣椒樣品于50mL的具塞玻璃比色管中，加入25mL甲醇–水溶液（體積比80∶20），漩渦混合2min，超聲提取60min后用超純水定容至50mL，混勻后以10000r／min離心5min。取上清液過0.22μm濾膜過濾后用液相色譜法進行測定。

1．4樣品測定

將20μL樣品溶液和羅丹明B標準溶液依次用液相色譜儀按1.2色譜條件進行測定，以保留時間定性，以色譜峰面積定量。

2結果與討論

2．1樣品提取條件選擇

羅丹明B是酸堿兩性化合物，易溶于水、甲醇、乙腈等。其甲醇溶液呈現玫瑰紅色，有強烈的熒光，參考文獻［9］，采用甲醇–水溶液（體積比80∶20）進行提取。

超聲提取是*簡單快捷的提取方法，回收率高，所需要時間短，溶劑量少，因此采用超聲提取法。超聲提取后直接用離心的方式對提取液進行初步凈化處理，與普通的過濾方法相比減少了待測組分的損失，提高了回收率。

2．2流動相的選擇

采用甲醇－水溶液作為流動相，對80∶20，75∶25，70∶30三種配比的甲醇－水體系進行試驗，羅丹明B的色譜保留時間分別為6.747，8.453，11.893min，色譜峰形均尖銳對稱，無拖尾、無干擾峰。當甲醇－水的體積比為80∶20和75∶25時，羅丹明B色譜峰與辣椒樣品基體成分色譜峰的分離度不高，存在干擾峰；甲醇－水的體積比為70∶30時，羅丹明B色譜峰附近無干擾峰，峰與峰之間的分離度*好，適合于羅丹明B的定性和定量。故實驗采用甲醇－水溶液（體積比70∶30）作為流動相。

圖1是在1.2色譜條件下加標辣椒樣品的液相色譜圖。從圖1中可以看出，該條件下羅丹明B色譜峰峰形良好，與辣椒基體成分色譜峰基線分離，易定性、定量。

2．3線性方程及檢出限

用羅丹明B標準儲備溶液逐級稀釋配制成質量濃度為4.0，10.0，20.0，40.0，100.0ng／mL羅丹明B標準系列溶液，對每個濃度水平分別測定，以色譜峰譜峰面積（Y）為縱坐標、羅丹明B溶液的質量濃度（X）為橫坐標進行線性回歸。結果顯示，色譜峰面積與羅丹明B溶液的質量濃度在0～100ng／mL范圍內呈現良好的線性關系，線性方程為Y=60450X–4912，相關系數r=0.9997。

隨試樣同時做空白試驗，對空白樣平行測定10次，計算空白值的標準偏差，以3倍空白值的標準偏差除以方法校準曲線的斜率，得方法的檢出限為2.5ng／g，該值低于標準SN／T2430–2010中規定的測定低限（5ng／g）［8］。

2．4精密度試驗

對10.0ng／mL的標準溶液進行6次平行測定，測定結果列于表1。由表1可知，測定結果的相對標準偏差為0.92%，表明該法精密度良好。

2．5回收試驗

采用在空白樣品中添加標準溶液的方法進行回收試驗。準確稱取相同的空白辣椒試樣3份，分別加入5.0，12.0，20.0ng／mL3個不同水平的羅丹明B標準溶液，與樣品本底同時進行提取處理和測定，回收試驗結果見表2。由表2可知，在添加質量濃度為5.0～20.0ng／mL時羅丹明B的回收率為94.7%～103.3%，相對標準偏差在0.72%～1.50%之間。回收率測定結果符合《實驗室質量控制規范食品理化檢測》［10］中的要求。

3結語

用HPLC法測定辣椒中的羅丹明B，通過對樣品前處理方法進行改進，對流動相條件進行合理優化，減低了檢出限，提高了回收率。該方法操作簡便、快速，準確度、靈敏度高，適用于辣椒中非法添加物羅丹明B的日常檢測，便于在檢測領域推廣應用。