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HPLC-MS/MS 檢測血液中蘇丹紅的方法研究

作者:百檢 時間:2022-11-28 來源:互聯網

檢測及試驗方法

  標準溶液的配制

  (1)標準儲備液:分別稱取10.0mg的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標準品,溶于乙腈,定容至100.0mL,得到濃度為100.0mg/L的標準貯備液。

  (2)標準系列:取標準儲備液用乙腈稀釋配制成0.40μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L的標準系列溶液,進樣前用0.25μm微孔濾膜過濾。

  分離檢測條件

  標準曲線

  系列工作溶液,以濃度為橫坐標,定量離子對峰面積為縱坐標,建立標準曲線,每個濃度測定3次,取平均值。蘇丹紅工作溶液放置避光處。

  精密度

  選取添加標準品(蘇丹紅Ⅰ~Ⅳ)50.0μg/L,重復測定6次,精密度以相對標準偏差RSD表示。

  回收率

  在小鼠血液中添加10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L,高、中、低3個濃度的標準溶液,樣品處理方法按“二、5”處理,計算回收率。

  色譜分離條件的選擇與優化

  比較了ZORBAX SB-C8(4.6mm×50mm,3.5μm)和VARIAN Pursuit C18(150mm×4.6mm,5μm)兩種色譜柱的分離情況。實驗結果表明,選用150mm的VARIANPursuit C18柱,分離時間較長,蘇丹紅Ⅲ的出峰時間為35min,且未分離出蘇丹紅Ⅳ。而用ZORBAX SBC8柱,在8min內就能達到較好的分離效果。因此,本研究選擇ZORBAX SB-C8色譜柱作為分離柱。

  對于流動相的比例,參照相關文獻的梯度洗脫程序進樣檢測的結果并不比單純采用0.25%甲酸∶乙腈=20∶80等度洗脫的分離效果好,而且等梯度洗脫避免了梯度洗脫基線漂移以及耗時長的缺點。因此,本實驗流動相中水相選擇了0.25%的甲酸水溶液,有機相選擇乙腈。水相與流動相比例為20∶80,色譜圖如圖1所示。

  質譜條件的優化

  本文選用電噴霧離子源正離子化方式對蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4種物質進行二級質譜分析,為了獲得更高的離子強度,在MRM的模式下采用質譜方法自動優化軟件對質譜條件進行優化,如表2所示。

  標準曲線

  將系列標準工作溶液按設置好的條件進行檢測,采用外標法定量,以X軸表示樣品濃度(μg/L),Y軸表示定量離子對峰面積作標準曲線圖,所得標準曲線的相關系數R2均大于0.99,如圖2所示。

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