茶葉中所含的多酚類物質是一種以兒茶素為主體的酚類化合物，是茶多酚的主體成分，兒茶素約占茶多酚總量的65%～80%,主要包括沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素（EC）、兒茶素（+C）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、沒食子基兒茶素沒食子酸酯（GCG）和表兒茶素沒食子酸酯（ECG）等。開發和利用天然抗氧化劑已經成為當今世界食品藥品科技發展的方向。兒茶素作為一種重要的抗氧化劑，主要用于抗癌、抗腫瘤、清除人體自由基，還可用于防止齲齒、抑菌等。研究發現EGCG在體內外對許多腫瘤細胞增殖具有抑制作用［1］。目前測定兒茶素組分的**方法為高效液相色譜（HPLC）法［2–6］。我國現行檢測茶葉中兒茶素組分及咖啡堿（CAF）的*新國家標準GB／T8313–2008［7］也是HPLC法，該法采用甲醇多次提取法對樣品進行前處理，操作繁瑣，流動相組成復雜，樣品分析時間過長，所需試劑和儀器多且昂貴。

筆者采用水提法進行樣品浸提，并與GB／T8313–2008進行比較，結果表明所建立的方法操作簡單，成本低，效率高，使用范圍廣，能同時測定7種兒茶素組分及咖啡堿，效果較好。

1實驗部分

1.1主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1260型，美國安捷倫科技有限公司；電子天平：BSA224S–CW型，北京賽多利斯科學儀器有限公司；恒溫水浴鍋：HH·SY21–Ni8型，北京長源實驗設備廠；抽濾裝置：2XZ–0.5型，浙江黃巖黎明實業公司；超純水制備器：TST–RO–20型，石家莊泰斯特儀器設備有限公司；數控超聲清洗器：KQ5200DE型，昆山市超聲儀器有限公司；離心機：TGL–20bR型，上海安亭科學儀器廠；快速混勻器：SK–1型，金壇市杰瑞爾電器有限公司；甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、乙睛：均為色譜純；乙酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、抗壞血酸：均為分析純；GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合對照品：國家植物功能成分利用工程技術研究中心／教育部茶學重點實驗室；各兒茶素組分及咖啡堿對照品：純度均不小于98%，北京世紀奧科生物技術有限公司；實驗用水為純凈水。

1.2色譜條件

色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱溫：35℃；紫外檢測器波長：278nm；流動相：A相（超純水），B相（N,N-二甲基甲酰胺︰甲醇︰冰乙酸=40︰2︰1.5）；流動相流速：1.0mL／min；進樣量：5μL。

1.3對照品溶液的配制

精密稱取GA，CAF，EGC，+C，EC，EGCG，GCG，ECG混合對照品適量，加純凈水配制成分別含9.71μg／mLGA，101.97μg／mLCAF，81.09μg／mLEGC，7.35μg／mL+C，64.23μg／mLEC，400.16μg／mLEGCG，7.27μg／mLGCG，91.83μg／mLECG的混合對照品溶液。

1.4供試品溶液的制備

取部分水提取液（GB／T8305–1987）［8］過0.45μm水系微孔濾膜。在1.2色譜條件下進行測定。采用保留時間識別各目標組分，以外標法確定相應組分的濃度。

2結果與分析

2.1色譜圖

在1.2色譜條件下取供試品溶液5μL進樣，記錄色譜圖。GB／T8305–1987水提取法色譜圖如圖1所示。

按照GB／T813–2008甲醇提取法進行樣品處理后進樣分析（不含GCG），供試品的色譜圖如圖2所示。圖2表明，甲醇提取法樣品中的EGCG與EC不能有效分離。

2.2線性回歸方程和相關系數

分別精密吸取混合對照品溶液2.5，5.0，7.5，10，12.5和15μL［9］，按1.2色譜條件進樣測定，同一體積的樣品平行分析3次，取其平均值。以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X，μL）為橫坐標作圖，得到各組分的線性回歸方程如表1。由表1可知，當對照品溶液進樣量在2.5～15μL，GA，CAF，EGC，DL-C+C，EC，EGCG，GCG和ECG8種組分的進樣量分別在0.0243～0.1456，0.2549～1.5296，0.2027～1.2164，0.0182～0.1102，0.1606～0.9634，1.0004～6.0024，0.0182～0.1090，0.2296～1.3774μg范圍內與色譜峰面積的線性關系良好，相關系數r為0.9910～0.9999。

2.3加標回收率及精密度

吸取9份已知含量的綠茶提取液各1mL，分為3組，每組3份。分別加入混合對照品溶液0.5，1.0，1.5mL，按實驗方法進行測定，計算GA，CAF，ECG，+C，EC，EGCG，GCG和ECG的含量，計算各組分的回收率及精密度，結果見表2。由表2可知，所有組分的回收率在98.60%～100.17%之間，測定結果的相對標準偏差（RSD)均小于0.48%，說明該方法重現性良好，檢測結果可靠，滿足檢測要求。

2.4樣品測定

取同一批號樣品6份，分別在1.2色譜條件下及按照國標方法進行6次平行測定，取平均值作為測定結果，見表3。由表3可知，與現行標準方法相比，水提取法測定結果的相對偏差在0.47%～5.55%之間。另外，水提法有部分脂溶性兒茶素不能完全溶出，而GB／T8313–2008甲醇提取法EGC，EGCG和ECG的含量相對較高；GA和+C測定結果差別不大，在誤差范圍內；用70%的甲醇溶液提取，雖然提取完全，但提取液中含有大量的葉綠素，進行液相色譜檢測時泵壓明顯增大，對色譜柱污染嚴重，使柱壽命縮短；甲醇提取法樣品中的EGCG和EC不能分離，對色譜柱的要求較高；甲醇提取法操作也較繁瑣，有機溶劑用量較大，不利于環保和節約成本。用水提取樣品不僅能達到較好的提取效果，且可以直接利用水浸出物的提取液，無需重新浸提，步驟簡便，成本較低。

3結語

用水浸出方式提取綠茶樣品，HPLC法測定茶葉中的兒茶素和咖啡堿，操作簡便，結果準確。